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GB 5009.259-2023 영문 PDF (GB5009.259-2023)
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GB 5009.259-2023: 국가 식품 안전 표준 - 식품의 비오틴 측정
영국 특허 제5009.259-2023호
영국
국가 표준
중화인민공화국
국가식품안전기준 - 비오틴 측정
음식
발행일 2023년 9월 6일
2024년 3월 6일에 구현됨
발행처. 중화인민공화국 국가보건위원회;
시장규제를 위한 국가총국.
목차
서문... 3
1 범위... 4
방법 I - 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법... 4
2 원칙... 4
3 시약 및 재료... 4
4 기구 및 장비... 6
5 분석 절차... 6
6 분석 결과의 표현... 9
7 정밀도... 10
8 기타... 10
방법 II - 미생물학적 방법... 10
9 원칙... 10
10 시약 및 재료... 10
11 악기 및 장비... 12
12 분석 절차... 13
13 분석 결과의 표현... 18
14 정밀도... 19
15 기타... 19
부록 A 비오틴 표준의 질량 스펙트럼 스캔 및 MRM 크로마토그램
해결책... 20
부록 B 배양 배지 준비... 21
국가식품안전기준 - 비오틴 측정
음식
1 범위
본 표준은 식품 중 비오틴을 측정하는 방법을 규정합니다.
방법 1 - 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법은 다음에 적용 가능합니다.
조제된 분유와 특수식품에서의 비오틴 측정.
방법 2 - 미생물학적 방법은 식품 중 비오틴을 측정하는 데 적용 가능합니다.
방법 I - 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량
분광법
2 원칙
검체를 용해하여 추출한 후 전분을 함유한 검체에
아밀라아제에 의한 효소 가수분해, 단백질 침전 및 원심 여과 및 분리
C18 역상 크로마토그래피 컬럼에서. 액체 크로마토그래피 - 탠덤을 채택
질량 분석법 다중 이온 반응 모니터링 모드 검출 및 동위원소 희석
정량적 결정을 위한 내부 표준 방법.
3 시약 및 재료
달리 지정되지 않는 한, 이 방법에 사용되는 시약은 모두 분석적으로 순수하며,
이 물은 GB/T 6682에 명시된 1등급 물입니다.
3.1 시약 및 재료
3.1.1 개미산(HCOOH). 크로마토그래피적으로 순수함.
3.1.2 아세토니트릴(CH3CN). 크로마토그래피적으로 순수함.
3.1.3 에탄올(CH3CH2OH). 크로마토그래피로 순수함.
3.1.4 포름산 암모늄(HCOONH4). 크로마토그래피적으로 순수함.
3.1.5 과염소산(HClO4). 70% ~ 72%.
3.1.6 수산화나트륨(NaOH). 순도 99.9%.
3.1.7 아밀라아제. 타카아밀라아제, CAS. 9001-19-8, 효소 활성 100 U/mg.
3.2 시약의 준비
3.2.1 0.1% 포름산-10mmol/L 포름산암모늄 수용액. 0.63g을 칭량한다.
포름산 암모늄을 100ml의 물에 녹인 후 1,000ml 시약에 옮겨 담는다.
병에 포름산 1mL을 넣고 물을 사용하여 1,000mL로 희석한 후 잘 흔들어 보관합니다.
나중에 사용.
3.2.2 수산화나트륨 용액(2 mol/L). 비이커에 수산화나트륨 8.00g을 넣고 무게를 측정합니다.
물 100ml를 더해 녹인 뒤, 잘 흔들어 나중에 사용하기 위해 보관하세요.
3.2.3 에탄올 용액(50%). 정확하게 측정-에탄올 500mL을 1,000mL 용기에 넣습니다.
시약병에 물을 넣어 1,000mL로 희석한 후 잘 흔들어 나중에 사용하기 위해 보관합니다.
3.3 참고자료
3.3.1 비오틴 기준 물질(C10H16N2O3S). CAS. 58-85-5, 순도 98% 또는 표준
국가로부터 인증을 받고 표준물질 인증서를 수여받았습니다.
3.3.2 비오틴-D4(C10D4H12N2O3S). CAS. 1217850-77-5, 순도 98%.
3.4 표준 용액의 제조
3.4.1 비오틴 표준 스톡 용액(100 g/mL) 순도 변환에 따라,
바이오틴 기준 물질 10.00mg을 정확하게 칭량하고 에탄올을 사용합니다(정확도 0.01mg)
용액(50%)을 녹여 100mL의 일정한 부피에 도달합니다. 용액을 다음 위치로 옮깁니다.
갈색 유리 병에 담아 밀봉한 후 20 C에서 보관합니다. 유효 기간은 3개월입니다.
3.4.2 비오틴 표준 중간용액(10 g/mL). 5.00 mL의 비오틴을 정확하게 추출합니다.
표준 스톡 용액(100 g/mL)을 50 mL 메스 플라스크에 넣고 에탄올 용액(50%)을 사용합니다.
50mL의 일정한 부피에 도달합니다. 용액을 갈색 유리 병으로 옮기고 밀봉합니다.
20 C에서 보관하십시오. 유효 기간은 3개월입니다.
3.4.3 비오틴 표준 중간용액(1 g/mL). 1.00 mL의 비오틴을 정확하게 추출합니다.
표준 중간 용액(10 g/mL)을 10 mL 메스 플라스크에 넣고 에탄올 용액을 사용합니다.
(50%) 10mL의 일정한 부피에 도달합니다. 용액을 갈색 유리 병으로 옮기고 밀봉합니다.
-20 C에서 보관하십시오. 유효 기간은 3개월입니다.
3.4.4 비오틴 표준 작업 용액(100 ng/mL). 정확하게 1.00 mL을 취합니다.
표준 중간용액(1 g/mL)을 넣고 이동상 A를 이용하여 일정한 부피가 되도록 함
10mL의 용액을 갈색 유리병에 옮기고 밀봉하여 4C에서 보관하십시오.
1개월 동안 유효합니다.
3.4.5 비오틴 표준 작업 용액(10 ng/mL). 1.00 mL의 비오틴을 정확하게 추출합니다.
표준 작업 용액(100 ng/mL)을 넣고 이동상 A를 사용하여 일정한 부피에 도달합니다.
10 mL. 사용 직전에 준비하세요.
비균일한 샘플은 모두 2mm 개구부 시험 체를 통과할 때까지 균일하게
혼합하고 샘플을 100g으로 나누어 넓은 입구 병에 보관합니다. 밀봉하여 보관합니다.
테스트. 균일한 샘플의 경우, 직접 균일하게 혼합하여 테스트를 위해 보관합니다.
5.1.2 반고체 샘플
샘플링 크기는 0.5kg보다 커야 합니다. 최소 3개의 패키지(동일한 배치에서)
수집해야 합니다. 모든 샘플이 균질화되고 용기에 균일하게 혼합된 후 보관합니다.
넓은 입 병에 100g을 담습니다. 밀봉하여 테스트를 위해 보관합니다.
5.1.3 액체 샘플
샘플링 크기는 0.5L보다 커야 합니다. 최소 3개의 패키지(동일한 배치에서)
수집해야 합니다. 모든 샘플을 용기에 균일하게 섞은 후 100mL를 보관합니다.
넓은 입 병에 담아 밀봉하고 테스트를 위해 보관하세요.
5.2 샘플의 전처리
5.2.1 전분이 없는 표본
시료 2g ~ 5g(0.001g 단위)을 정확하게 달아 50mL 용기에 담는다.
원심분리관. 750 L의 동위원소 내부 표준 작업 용액을 추가한 다음 30mL을 추가합니다.
따뜻한 물(35℃ ~ 40℃)에 넣고 흔들어 균일하게 섞은 후 초음파 추출을 실시한다.
15분. 꺼낸 후 빨리 실온으로 식힌 후 과염소산으로 조절한다.
pH를 약 1.6으로 조정합니다. 4 C, 8,500 r/min에서 10분간 원심분리합니다. 유리 여과 후
섬유, 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH를 4.6 0.1로 조정합니다. 샘플 용액을 다음으로 옮깁니다.
50mL 용량 플라스크에 물을 넣어 일정한 용량으로 눈금까지 맞춘 후 고르게 섞습니다.
그런 다음 추출 용액 1.5mL를 2mL 원심분리관으로 옮깁니다. 10,000r/min에서,
10분간 원심분리한다. 0.22 m 수성 필터 멤브레인을 통해 샘플 용액을 여과한다.
그리고 그것을 기계로 분석합니다.
5.2.2 전분 함유 표본
시료 2g ~ 5g(0.001g 단위)을 정확하게 달아 50mL 용기에 담는다.
원심분리관에 아밀라아제 샘플량의 1%와 750L의 동위원소 내부를 첨가합니다.
표준작업용액에 따뜻한 물(35℃ ~ 40℃) 30ml를 더해 흔들어 균일하게 섞는다.
섞어줍니다. 50C ~ 60C 배양기에 넣어 약 30분간 방치한 후 꺼내어 초음파 세척을 실시합니다.
15분간 추출한 후 꺼내어 빨리 실온으로 식혀서 사용하세요.
과염소산을 사용하여 pH를 약 1.6으로 조정합니다. 4 C, 8,500 r/min에서 10분간 원심분리합니다. 그 후
유리섬유로 여과하고 수산화나트륨을 사용...
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GB 5009.259-2023: 국가 식품 안전 표준 - 식품의 비오틴 측정
영국 특허 제5009.259-2023호
영국
국가 표준
중화인민공화국
국가식품안전기준 - 비오틴 측정
음식
발행일 2023년 9월 6일
2024년 3월 6일에 구현됨
발행처. 중화인민공화국 국가보건위원회;
시장규제를 위한 국가총국.
목차
서문... 3
1 범위... 4
방법 I - 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법... 4
2 원칙... 4
3 시약 및 재료... 4
4 기구 및 장비... 6
5 분석 절차... 6
6 분석 결과의 표현... 9
7 정밀도... 10
8 기타... 10
방법 II - 미생물학적 방법... 10
9 원칙... 10
10 시약 및 재료... 10
11 악기 및 장비... 12
12 분석 절차... 13
13 분석 결과의 표현... 18
14 정밀도... 19
15 기타... 19
부록 A 비오틴 표준의 질량 스펙트럼 스캔 및 MRM 크로마토그램
해결책... 20
부록 B 배양 배지 준비... 21
국가식품안전기준 - 비오틴 측정
음식
1 범위
본 표준은 식품 중 비오틴을 측정하는 방법을 규정합니다.
방법 1 - 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법은 다음에 적용 가능합니다.
조제된 분유와 특수식품에서의 비오틴 측정.
방법 2 - 미생물학적 방법은 식품 중 비오틴을 측정하는 데 적용 가능합니다.
방법 I - 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량
분광법
2 원칙
검체를 용해하여 추출한 후 전분을 함유한 검체에
아밀라아제에 의한 효소 가수분해, 단백질 침전 및 원심 여과 및 분리
C18 역상 크로마토그래피 컬럼에서. 액체 크로마토그래피 - 탠덤을 채택
질량 분석법 다중 이온 반응 모니터링 모드 검출 및 동위원소 희석
정량적 결정을 위한 내부 표준 방법.
3 시약 및 재료
달리 지정되지 않는 한, 이 방법에 사용되는 시약은 모두 분석적으로 순수하며,
이 물은 GB/T 6682에 명시된 1등급 물입니다.
3.1 시약 및 재료
3.1.1 개미산(HCOOH). 크로마토그래피적으로 순수함.
3.1.2 아세토니트릴(CH3CN). 크로마토그래피적으로 순수함.
3.1.3 에탄올(CH3CH2OH). 크로마토그래피로 순수함.
3.1.4 포름산 암모늄(HCOONH4). 크로마토그래피적으로 순수함.
3.1.5 과염소산(HClO4). 70% ~ 72%.
3.1.6 수산화나트륨(NaOH). 순도 99.9%.
3.1.7 아밀라아제. 타카아밀라아제, CAS. 9001-19-8, 효소 활성 100 U/mg.
3.2 시약의 준비
3.2.1 0.1% 포름산-10mmol/L 포름산암모늄 수용액. 0.63g을 칭량한다.
포름산 암모늄을 100ml의 물에 녹인 후 1,000ml 시약에 옮겨 담는다.
병에 포름산 1mL을 넣고 물을 사용하여 1,000mL로 희석한 후 잘 흔들어 보관합니다.
나중에 사용.
3.2.2 수산화나트륨 용액(2 mol/L). 비이커에 수산화나트륨 8.00g을 넣고 무게를 측정합니다.
물 100ml를 더해 녹인 뒤, 잘 흔들어 나중에 사용하기 위해 보관하세요.
3.2.3 에탄올 용액(50%). 정확하게 측정-에탄올 500mL을 1,000mL 용기에 넣습니다.
시약병에 물을 넣어 1,000mL로 희석한 후 잘 흔들어 나중에 사용하기 위해 보관합니다.
3.3 참고자료
3.3.1 비오틴 기준 물질(C10H16N2O3S). CAS. 58-85-5, 순도 98% 또는 표준
국가로부터 인증을 받고 표준물질 인증서를 수여받았습니다.
3.3.2 비오틴-D4(C10D4H12N2O3S). CAS. 1217850-77-5, 순도 98%.
3.4 표준 용액의 제조
3.4.1 비오틴 표준 스톡 용액(100 g/mL) 순도 변환에 따라,
바이오틴 기준 물질 10.00mg을 정확하게 칭량하고 에탄올을 사용합니다(정확도 0.01mg)
용액(50%)을 녹여 100mL의 일정한 부피에 도달합니다. 용액을 다음 위치로 옮깁니다.
갈색 유리 병에 담아 밀봉한 후 20 C에서 보관합니다. 유효 기간은 3개월입니다.
3.4.2 비오틴 표준 중간용액(10 g/mL). 5.00 mL의 비오틴을 정확하게 추출합니다.
표준 스톡 용액(100 g/mL)을 50 mL 메스 플라스크에 넣고 에탄올 용액(50%)을 사용합니다.
50mL의 일정한 부피에 도달합니다. 용액을 갈색 유리 병으로 옮기고 밀봉합니다.
20 C에서 보관하십시오. 유효 기간은 3개월입니다.
3.4.3 비오틴 표준 중간용액(1 g/mL). 1.00 mL의 비오틴을 정확하게 추출합니다.
표준 중간 용액(10 g/mL)을 10 mL 메스 플라스크에 넣고 에탄올 용액을 사용합니다.
(50%) 10mL의 일정한 부피에 도달합니다. 용액을 갈색 유리 병으로 옮기고 밀봉합니다.
-20 C에서 보관하십시오. 유효 기간은 3개월입니다.
3.4.4 비오틴 표준 작업 용액(100 ng/mL). 정확하게 1.00 mL을 취합니다.
표준 중간용액(1 g/mL)을 넣고 이동상 A를 이용하여 일정한 부피가 되도록 함
10mL의 용액을 갈색 유리병에 옮기고 밀봉하여 4C에서 보관하십시오.
1개월 동안 유효합니다.
3.4.5 비오틴 표준 작업 용액(10 ng/mL). 1.00 mL의 비오틴을 정확하게 추출합니다.
표준 작업 용액(100 ng/mL)을 넣고 이동상 A를 사용하여 일정한 부피에 도달합니다.
10 mL. 사용 직전에 준비하세요.
비균일한 샘플은 모두 2mm 개구부 시험 체를 통과할 때까지 균일하게
혼합하고 샘플을 100g으로 나누어 넓은 입구 병에 보관합니다. 밀봉하여 보관합니다.
테스트. 균일한 샘플의 경우, 직접 균일하게 혼합하여 테스트를 위해 보관합니다.
5.1.2 반고체 샘플
샘플링 크기는 0.5kg보다 커야 합니다. 최소 3개의 패키지(동일한 배치에서)
수집해야 합니다. 모든 샘플이 균질화되고 용기에 균일하게 혼합된 후 보관합니다.
넓은 입 병에 100g을 담습니다. 밀봉하여 테스트를 위해 보관합니다.
5.1.3 액체 샘플
샘플링 크기는 0.5L보다 커야 합니다. 최소 3개의 패키지(동일한 배치에서)
수집해야 합니다. 모든 샘플을 용기에 균일하게 섞은 후 100mL를 보관합니다.
넓은 입 병에 담아 밀봉하고 테스트를 위해 보관하세요.
5.2 샘플의 전처리
5.2.1 전분이 없는 표본
시료 2g ~ 5g(0.001g 단위)을 정확하게 달아 50mL 용기에 담는다.
원심분리관. 750 L의 동위원소 내부 표준 작업 용액을 추가한 다음 30mL을 추가합니다.
따뜻한 물(35℃ ~ 40℃)에 넣고 흔들어 균일하게 섞은 후 초음파 추출을 실시한다.
15분. 꺼낸 후 빨리 실온으로 식힌 후 과염소산으로 조절한다.
pH를 약 1.6으로 조정합니다. 4 C, 8,500 r/min에서 10분간 원심분리합니다. 유리 여과 후
섬유, 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH를 4.6 0.1로 조정합니다. 샘플 용액을 다음으로 옮깁니다.
50mL 용량 플라스크에 물을 넣어 일정한 용량으로 눈금까지 맞춘 후 고르게 섞습니다.
그런 다음 추출 용액 1.5mL를 2mL 원심분리관으로 옮깁니다. 10,000r/min에서,
10분간 원심분리한다. 0.22 m 수성 필터 멤브레인을 통해 샘플 용액을 여과한다.
그리고 그것을 기계로 분석합니다.
5.2.2 전분 함유 표본
시료 2g ~ 5g(0.001g 단위)을 정확하게 달아 50mL 용기에 담는다.
원심분리관에 아밀라아제 샘플량의 1%와 750L의 동위원소 내부를 첨가합니다.
표준작업용액에 따뜻한 물(35℃ ~ 40℃) 30ml를 더해 흔들어 균일하게 섞는다.
섞어줍니다. 50C ~ 60C 배양기에 넣어 약 30분간 방치한 후 꺼내어 초음파 세척을 실시합니다.
15분간 추출한 후 꺼내어 빨리 실온으로 식혀서 사용하세요.
과염소산을 사용하여 pH를 약 1.6으로 조정합니다. 4 C, 8,500 r/min에서 10분간 원심분리합니다. 그 후
유리섬유로 여과하고 수산화나트륨을 사용...
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