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NY/T 1663-2008 英語 PDF (NYT1663-2008)

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NY/T 1663-2008: 牛乳および乳製品中のβ-ラクトグロブリン含有量の測定 SDS-PAGE 電気泳動
ニューヨーク/T 1663-2008
農業産業標準
中華人民共和国
ICS67.120.01
B45
牛乳中のβ-ラクトグロブリン含有量の測定
乳製品 -- SDS-PAGE 電気泳動
発行日: 2008年7月14日
実施日: 2008 年 8 月 1 日
発行元:中華人民共和国農業部
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 原則…4
4 試薬…4
5 装置 ... 7
6 分析手順 ... 7
7 結果の計算 ... 9
8 精度 ... 10
付録A(参考)ゲルによるβ-ラクトグロブリン測定の典型的なマップ
電気泳動…11
牛乳中のβ-ラクトグロブリン含有量の測定
乳製品 -- SDS-PAGE 電気泳動
1 範囲
この規格は、牛乳中のβ-ラクトグロブリン含有量の測定を規定し、
SDS-PAGE 電気泳動による乳製品。
この規格は、牛乳中のβ-ラクトグロブリン含有量の測定に適用され、
乳製品(生乳、粉乳、液乳、チーズ、ホエイパウダー)。
この規格における液体サンプルの検出限界は24mg/100mLであるが、
固液混在サンプルおよび固体サンプルの検出限界は240mg/100gです。
2 規範的参照
以下の文書の規定は、この規格の規定となる。
この規格の参照。日付の付いた参照については、その後の修正
(訂正を除く)または改訂は、この規格には適用されませんが、当事者は
この標準に基づいて合意に達した人は、最新の
これらの文書のバージョンが適用されます。日付のない参考文献については、最新版
参照文書のが適用されます。
GB/T 6682 実験室用水 - 仕様
3 原則
サンプルをSDS-PAGEゲルで電気泳動した後、β-ラクトグロブリンを測定する。
光学濃度計で分析し、β-ラクトグロブリン含有量を測定しました。
試薬4個
別途指定がない限り、分析的に純粋であることが確認された試薬のみが
分析に使用される実験水は、クラス-
GB/T 6682に規定されている水です。
4.1 氷酢酸(CH3COOH)
4.20 ランニングゲル緩衝液ストック溶液、1.5 mol/L、pH 8.8
トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(4.9)9.08gを正確に取り、40mLの水に溶解する。
水; 塩酸溶液(4.17)でpHを8.8に調整します。水を使用して
定容を50mLにし、4℃で保存する。
4.21 過硫酸塩溶液、100g/L
過硫酸アンモニウム(4.4)0.1gを正確に量り、1mLの水を加えて溶解し、
使用前に準備してください。
4.22 ドデシルスルホン酸ナトリウム溶液、100g/L
ドデシルスルホン酸ナトリウム(4.13)5gを正確に取り、水に溶かして
50mLに定容し、室温で保存します。
4.23 体積分率10%のN, N, N', N'-テトラメチルエチレンジアミン溶液
N, N, N', N'-テトラメチルエチレンジアミン(4.14)0.10mLを水で希釈し、
定容を1.00mLにします。
4.24 サンプルバッファー、0.08mol/L
ブロモフェノールブルー(4.15)4mgを正確に取り、5.00mLの水に溶かします。
それぞれ、スタッキングゲル緩衝液ストック溶液(4.19)1.60mL、
ドデシルスルホン酸ナトリウム溶液(4.22)、β-メルカプトエタノール(4.10)1.20mL、
グリセリン2.20mL(4.7)を混ぜ、水で希釈して定容にする
20mLに希釈し、4℃で保存する。
4.25 電極緩衝液、pH 8.3
トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(4.9)3.0gとグリシン14.4gを正確に摂取する
(4.8);ドデシルスルホン酸ナトリウム溶液(4.22)10mLを加え、pHを
8.3; 定容して1000mLにする。
4.26 クマシーブリリアントブルー染色液、2.5g/L
クマシーブリリアントブルーR-250(4.16)0.25gと硫酸アンモニウム10gを混ぜる。
(4.3);それぞれ、エタノール(4.6)20mLとリン酸(4.2)10mLを加える。
溶かして混ぜ、水を加えて100mLの定容にする。
4.27 脱色液
それぞれ、氷酢酸(4.1)75mL、メタノール(4.5)50mL、水875mLを採取する。
水を加え、均一に混ぜます。
4.28 β-ラクトグロブリン標準液、1.00 mg/mL
β-ラクトグロブリン標準物質(純度90%以上)0.0100gを正確に採取し、
サンプル緩衝液(4.24)を10mLに定容し、沸騰湯浴で加熱する。
3分~5分、-20℃以下で保存してください。
5 装置
一般的に使用される実験器具と以下のアイテム。
5.1 0.0001gの感度を持つ天秤。
5.2 電気泳動装置
5.3 電気泳動槽、100mm×83mm。
5.4 光学密度スキャナ。
5.5 マイクロシリンジ、10μL。
5.6 遠心分離機、7000 r/min以上
5.7 マグネティックスターラー
5.8 ストッパー付きの試験管を遠心分離します。
6 分析手順
6.1 試料の準備
6.1.1 液体サンプル
サンプル1mLを採取し、水1mLとサンプル緩衝液(4.24)2mLを順次加える。
沸騰水浴で3分~5分加熱し、マグネチックスターラー(5.7)で4時間撹拌し、遠心分離機で分離する。
5分間加熱し、脂肪を除去し、上清を取り分けて小分けし、後で使用するために-20°Cで保存します。
6.1.2 固体サンプル
サンプル1g(0.1mgの精度)を採取し、適量の水を加えて溶かします。
定容を10mLとし、6.1.1に従って操作する。
6.2 ランニングジェルの調製
表1に従って12%ランニングジェル20mLを準備し、混ぜて、
長いガラス板と短いガラス板の間には、高さ約60mm~70mmの隙間があります。ゆっくりと
長いガラス板の壁に沿って約5mmの高さまで水を注入し、水を封じ込めます。
約30分後、ゲルと異なる防水層の境界が
6.8 脱染
ジェルを染色した後、まず表面を洗い流して余分な汚れを取り除き、その後
脱色液(4.27)に浸して脱色します。脱色液を交換する
ゲルの背景が無色になるまで溶液を注ぎます。
6.9 分析
密度計を使用してゲルを測定・分析し、β-含有量を計算します。
ラクトグロブリンを光学密度値に従って分類します。一般的なマップについては、付録 A を参照してください。
7 結果の計算
試料中のβ-ラクトグロブリン含有量は質量分率で計算される。
X; 値は100グラムあたりのグラム数または100ミリリットルあたりのグラム数で表されます
(mg/100gまたはmg/100mL)であり、式(1)に従って計算される。
どこ:
OD – 検体溶液中のβ-ラクトグロブリンの光学密度値。
Cstd – 標準溶液中のβ-ラクトグロブリンの濃度(mg/mL)
V1 – サンプルの定容積(mL)
ODstd – β-ラクトグロブリン標準溶液の光学密度値。
V2 – 検体のサンプルロード量(µL単位)
Vs – β-ラクトグロブリン標準溶液のサンプルロード量(µL)
f – 希釈係数;
m – 試料の質量(g)。
測定結果は、平行線の算術平均値で表される。
決定; 有効数字3桁を保持するものとする。
注記 E: 標準曲線の相関係数 r ≥ 0.99。

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