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HG 3616-1999 英語 PDF (HG3616-1999)
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HG 3616-1999: [HG/T 3616-1999] バチルス・チューリンゲンシス技術
HG3616-1999
HG
化学業界標準
中華人民共和国
バチルス・チューリンゲンシス技術
承認日: 1999年6月16日
実施日: 2000 年 6 月 1 日
承認機関: 国立石油化学工業局
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 要件 ... 4
4 試験方法 ... 5
5 検査ルール ... 10
6 マーク、ラベル、包装、保管、輸送... 10
付録A(参考)電気泳動ゲルの調製...11
付録B(標準)毒性の強さの測定...13
バチルス・チューリンゲンシス技術
バチルス・チューリンゲンシス(B. t.)は最も広く使用されている微生物殺虫剤です。その主な
殺虫成分は、胞子体結晶中の毒素タンパク質である。
チョウ目昆虫に有毒なタンパク質の分子量は130000です。
1 範囲
この規格は、要件、試験方法、マーク、ラベル、包装、
バチルス・チューリンゲンシス生粉末の保管および輸送。
この規格は、バチルス・チューリンゲンシスの原末に適用され、
チョウ目の害虫。
2 規範的参照
以下の規格には、この規格で参照されることにより、
この規格の規定を構成する。発行時点では、版は
有効です。すべての標準は改訂される可能性があります。この標準を使用している当事者は、
以下の規格の最新バージョンを使用する可能性を検討するものとする。
GB/T 1250-1989、限界値の表現と判定の規則
GB/T 1600-1979 (1989)、農薬中の水分含有量の測定
GB/T 1601-1993、農薬のpH値の測定方法
GB/T 1604-1995、商品農薬の受け入れ規制
GB/T 1605-1979 (1989)、市販農薬のサンプリング方法
GB 3796-1983、農薬の包装に関する一般規則
GB/T 16150-1995、農薬の散布可能および湿潤可能な粉末のふるい試験
3 要件
3.1 外観: オフホワイトから黄褐色の粉末。
3.2 バチルス・チューリンゲンシスの原料粉末は、表1の要件を満たすものとする。
4.3.1.2 器具、機器
電気泳動。
サンドイッチ型縦型電気泳動槽(溝付1.5mm凹型ゴム枠)、
ゲルプレート面積145mm×100mm(1.5mm、12ウェルサンプルタンクモールド)。
高速薄層断層撮影スキャナまたは電気泳動画像スキャナ。
遠心分離機:10000r/min。
分析天秤:0.0001gまでの精度。
4.3.1.3 試薬と溶液
過硫酸アンモニウム(AP)。
ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)。
テトラメチルエチレンジアミン(TEMED)。
水酸化ナトリウム。
30%アクリルアミド:アクリルアミド30g、メチレンビスアクリルアミド0.8g(旧称
メチレンビスアクリルアミドとして知られている。100mLの蒸留水に溶解する。濾過する。保存する
将来使用するために、暗所で 4°C で保存します。
1mol/L、pH8.8トリスヒドロキシメチルアミノメタン-HCl緩衝液:30.25gを量り、
トリスヒドロキシメチルアミノメタンを蒸留水に溶かし、pH8.8に調整する。
濃塩酸。蒸留水を使用して容量を250mLに一定にします。
1mol/L、pH6.8トリスヒドロキシメチルアミノメタン-HCl緩衝液:12.10gを計量する
トリスヒドロキシメチルアミノメタンを蒸留水に溶かし、pH6.8に調整する。
濃塩酸。蒸留水を使用して容積を100mLに一定にします。
電極緩衝液:トリスヒドロキシメチルアミノメタン3.03g、
グリシン、ラウリル硫酸ナトリウム1g。水で溶かし、体積を一定にして
1000mLです。
3倍サンプル希釈液:1mol/L、pH6.8トリスヒドロキシメチルアミノメタン-HCl 18.75mL、
ラウリル硫酸ナトリウム6g、グリセリン30mL、メルカプトエタノール15mL、少量
ブロモフェノールブルー。蒸留水を使用して、容量を 100mL に一定に設定します。
染色液:クマシーブリリアントブルー(CBB)R-250を1g計量し、450mLの
メタノール、氷酢酸100mL、蒸留水450mLを混ぜ、溶かして濾過する。
将来の使用のために。
脱色液:メタノール100mL、氷酢酸35mLを計量し、
蒸留水を加えて体積を1000mLに一定にします。
リンス液:無水エタノール30mL、氷酢酸10mL、
蒸留水60mL。使用前によく混ぜてください。
毒素タンパク質標準サンプル:毒素タンパク質(相対分子量)の原料粉末
質量は130000)含有量は9.3%です。
4.3.1.4 標本処理
標準サンプルと検体(精度0.1mg)をそれぞれ20mg秤量します。
5mL遠心管に移し、2mLの水を加えて完全に懸濁します。次に0.45mLを加えます。
0.55mol/L水酸化ナトリウム溶液(最終ナトリウム濃度が
水酸化ナトリウム溶液は0.1mol/Lである。約5分間放置する。その後、1.30mLの3倍サンプルを加える。
希釈液を加え、最終容量を3.75mLにします。100℃の沸騰水で6分間煮沸します。
遠心分離機(2000 r/min)で10分間遠心分離し、上清を採取してサンプルを調製する。
電気泳動用。
4.3.1.5 毒素タンパク質のSDS-PAGE分離
a) 8%~10%のポリアクリルアミドゲルを準備する
不連続緩衝液システムを使用する。ゲルの作製方法については付録Aを参照。
(参考情報)。
b) サンプルのロード
上記標準試料溶液の上清を採取し、6を負荷し、
8、10、12、14μLのサンプルをポリアクリルアミドゲルのサンプルウェルに入れる
(毒素タンパク質含有量は約3〜7μg)を標準曲線として示します。
検体溶液(毒素タンパク質)の上清を一定量採取する
(含有量は約5μg)サンプルウェルに加える。電極緩衝液を注入した後、
電源を入れます。
c) 電気泳動
電気泳動の初期電圧は約100Vに制御されます。
検体が分離ゲルに入ったら、電圧を120Vに上げて継続する
電気泳動。インジケータの先端が約100μLに達したら電気泳動を停止します。
底から1cmのところまでゲルプレートを取り出し、7.5%(体積%)の酢酸に浸します。
酸に30分間浸します。
d) 染色
分離ゲルを取り除き、クマシーブリリアントブルー(CBB)で一晩染色します。
R-250染色液。
e) 脱色
ピリジン。
その他は4.3.1.3と同じです。
4.3.2.4 標本処理
4.3.1.4と同じです。
4.3.2.5 毒素タンパク質のSDS-PAGE分離
a) 8%~10%のポリアクリルアミドゲルを準備する
4.3.1.5aと同じ。
b) サンプルのロード
上記の標準溶液の上清を採取し、15、20、30、40、50μLの
サンプルをそれぞれサンプルウェルに注入します(毒素タンパク質含有量は約
7.5~25μg)を標準曲線として用い、一定量の上清を採取する。
検体溶液(毒素タンパク質含有量は約15μg)に加える。
電極バッファーを注入したら電源を入れます。
c) 電気泳動
4.3.1.5c と同じ。
d) 染色
4.3.1.5dと同じ。
e) 脱色
4.3.1.5eと同じ。
4.3.2.6 決定
検査する部分をメスで削り取り、ガラス試験管に入れます。その後、3.0mLを加えます。
25%ピリジン(体積分率)を37°Cで振とうし、コックスブリリアントブルー(CBB)を溶出させる。
R-250は毒素タンパク質に吸着されます。平衡後、分光光度計を使用します。
25%ピリジンを基準として、605nmで溶液の吸光度を測定する。毒素
タンパク質含有量は式(1)で計算される。
4.3.2.7 許容差
算術平均値を判定結果としてとる。
2つの並行判定結果が8%以下である。
4.4 毒性の強さの判定
付録A
(参考)
電気泳動ゲルの調製
A1 プレートの準備
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HG 3616-1999: [HG/T 3616-1999] バチルス・チューリンゲンシス技術
HG3616-1999
HG
化学業界標準
中華人民共和国
バチルス・チューリンゲンシス技術
承認日: 1999年6月16日
実施日: 2000 年 6 月 1 日
承認機関: 国立石油化学工業局
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 要件 ... 4
4 試験方法 ... 5
5 検査ルール ... 10
6 マーク、ラベル、包装、保管、輸送... 10
付録A(参考)電気泳動ゲルの調製...11
付録B(標準)毒性の強さの測定...13
バチルス・チューリンゲンシス技術
バチルス・チューリンゲンシス(B. t.)は最も広く使用されている微生物殺虫剤です。その主な
殺虫成分は、胞子体結晶中の毒素タンパク質である。
チョウ目昆虫に有毒なタンパク質の分子量は130000です。
1 範囲
この規格は、要件、試験方法、マーク、ラベル、包装、
バチルス・チューリンゲンシス生粉末の保管および輸送。
この規格は、バチルス・チューリンゲンシスの原末に適用され、
チョウ目の害虫。
2 規範的参照
以下の規格には、この規格で参照されることにより、
この規格の規定を構成する。発行時点では、版は
有効です。すべての標準は改訂される可能性があります。この標準を使用している当事者は、
以下の規格の最新バージョンを使用する可能性を検討するものとする。
GB/T 1250-1989、限界値の表現と判定の規則
GB/T 1600-1979 (1989)、農薬中の水分含有量の測定
GB/T 1601-1993、農薬のpH値の測定方法
GB/T 1604-1995、商品農薬の受け入れ規制
GB/T 1605-1979 (1989)、市販農薬のサンプリング方法
GB 3796-1983、農薬の包装に関する一般規則
GB/T 16150-1995、農薬の散布可能および湿潤可能な粉末のふるい試験
3 要件
3.1 外観: オフホワイトから黄褐色の粉末。
3.2 バチルス・チューリンゲンシスの原料粉末は、表1の要件を満たすものとする。
4.3.1.2 器具、機器
電気泳動。
サンドイッチ型縦型電気泳動槽(溝付1.5mm凹型ゴム枠)、
ゲルプレート面積145mm×100mm(1.5mm、12ウェルサンプルタンクモールド)。
高速薄層断層撮影スキャナまたは電気泳動画像スキャナ。
遠心分離機:10000r/min。
分析天秤:0.0001gまでの精度。
4.3.1.3 試薬と溶液
過硫酸アンモニウム(AP)。
ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)。
テトラメチルエチレンジアミン(TEMED)。
水酸化ナトリウム。
30%アクリルアミド:アクリルアミド30g、メチレンビスアクリルアミド0.8g(旧称
メチレンビスアクリルアミドとして知られている。100mLの蒸留水に溶解する。濾過する。保存する
将来使用するために、暗所で 4°C で保存します。
1mol/L、pH8.8トリスヒドロキシメチルアミノメタン-HCl緩衝液:30.25gを量り、
トリスヒドロキシメチルアミノメタンを蒸留水に溶かし、pH8.8に調整する。
濃塩酸。蒸留水を使用して容量を250mLに一定にします。
1mol/L、pH6.8トリスヒドロキシメチルアミノメタン-HCl緩衝液:12.10gを計量する
トリスヒドロキシメチルアミノメタンを蒸留水に溶かし、pH6.8に調整する。
濃塩酸。蒸留水を使用して容積を100mLに一定にします。
電極緩衝液:トリスヒドロキシメチルアミノメタン3.03g、
グリシン、ラウリル硫酸ナトリウム1g。水で溶かし、体積を一定にして
1000mLです。
3倍サンプル希釈液:1mol/L、pH6.8トリスヒドロキシメチルアミノメタン-HCl 18.75mL、
ラウリル硫酸ナトリウム6g、グリセリン30mL、メルカプトエタノール15mL、少量
ブロモフェノールブルー。蒸留水を使用して、容量を 100mL に一定に設定します。
染色液:クマシーブリリアントブルー(CBB)R-250を1g計量し、450mLの
メタノール、氷酢酸100mL、蒸留水450mLを混ぜ、溶かして濾過する。
将来の使用のために。
脱色液:メタノール100mL、氷酢酸35mLを計量し、
蒸留水を加えて体積を1000mLに一定にします。
リンス液:無水エタノール30mL、氷酢酸10mL、
蒸留水60mL。使用前によく混ぜてください。
毒素タンパク質標準サンプル:毒素タンパク質(相対分子量)の原料粉末
質量は130000)含有量は9.3%です。
4.3.1.4 標本処理
標準サンプルと検体(精度0.1mg)をそれぞれ20mg秤量します。
5mL遠心管に移し、2mLの水を加えて完全に懸濁します。次に0.45mLを加えます。
0.55mol/L水酸化ナトリウム溶液(最終ナトリウム濃度が
水酸化ナトリウム溶液は0.1mol/Lである。約5分間放置する。その後、1.30mLの3倍サンプルを加える。
希釈液を加え、最終容量を3.75mLにします。100℃の沸騰水で6分間煮沸します。
遠心分離機(2000 r/min)で10分間遠心分離し、上清を採取してサンプルを調製する。
電気泳動用。
4.3.1.5 毒素タンパク質のSDS-PAGE分離
a) 8%~10%のポリアクリルアミドゲルを準備する
不連続緩衝液システムを使用する。ゲルの作製方法については付録Aを参照。
(参考情報)。
b) サンプルのロード
上記標準試料溶液の上清を採取し、6を負荷し、
8、10、12、14μLのサンプルをポリアクリルアミドゲルのサンプルウェルに入れる
(毒素タンパク質含有量は約3〜7μg)を標準曲線として示します。
検体溶液(毒素タンパク質)の上清を一定量採取する
(含有量は約5μg)サンプルウェルに加える。電極緩衝液を注入した後、
電源を入れます。
c) 電気泳動
電気泳動の初期電圧は約100Vに制御されます。
検体が分離ゲルに入ったら、電圧を120Vに上げて継続する
電気泳動。インジケータの先端が約100μLに達したら電気泳動を停止します。
底から1cmのところまでゲルプレートを取り出し、7.5%(体積%)の酢酸に浸します。
酸に30分間浸します。
d) 染色
分離ゲルを取り除き、クマシーブリリアントブルー(CBB)で一晩染色します。
R-250染色液。
e) 脱色
ピリジン。
その他は4.3.1.3と同じです。
4.3.2.4 標本処理
4.3.1.4と同じです。
4.3.2.5 毒素タンパク質のSDS-PAGE分離
a) 8%~10%のポリアクリルアミドゲルを準備する
4.3.1.5aと同じ。
b) サンプルのロード
上記の標準溶液の上清を採取し、15、20、30、40、50μLの
サンプルをそれぞれサンプルウェルに注入します(毒素タンパク質含有量は約
7.5~25μg)を標準曲線として用い、一定量の上清を採取する。
検体溶液(毒素タンパク質含有量は約15μg)に加える。
電極バッファーを注入したら電源を入れます。
c) 電気泳動
4.3.1.5c と同じ。
d) 染色
4.3.1.5dと同じ。
e) 脱色
4.3.1.5eと同じ。
4.3.2.6 決定
検査する部分をメスで削り取り、ガラス試験管に入れます。その後、3.0mLを加えます。
25%ピリジン(体積分率)を37°Cで振とうし、コックスブリリアントブルー(CBB)を溶出させる。
R-250は毒素タンパク質に吸着されます。平衡後、分光光度計を使用します。
25%ピリジンを基準として、605nmで溶液の吸光度を測定する。毒素
タンパク質含有量は式(1)で計算される。
4.3.2.7 許容差
算術平均値を判定結果としてとる。
2つの並行判定結果が8%以下である。
4.4 毒性の強さの判定
付録A
(参考)
電気泳動ゲルの調製
A1 プレートの準備
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