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GB/T 38484-2020 英語 PDF (GBT38484-2020)
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GB/T 38484-2020: 植物ホルモン関連二次代謝産物の生物活性の測定 - 細胞学的方法
38484-2020 国際電気標準会議
イギリス
国家標準の
中華人民共和国
ICS07.080
21 21
植物の生物学的活性の測定
ホルモン関連二次代謝物 - 細胞学的
方法
発行日: 2020年11月19日
実施日: 2020年11月19日
発行元:国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語、定義、略語 ... 4
4 原則 ... 5
5 試薬または材料...6
6 装置 ... 8
7 測定手順 ... 8
8 再現性 ... 11
付録A(参考)テストデータの記録シート...12
植物の生物学的活性の測定
ホルモン関連二次代謝物 - 細胞学的
方法
1 範囲
この規格は、植物の生物学的活性を測定する方法を規定する。
細胞学的評価によるホルモン関連二次代謝物。
この規格は、オーキシン、サイトカイニン、および
ジベレリンは植物ホルモン関連の二次代謝産物です。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の記載された文書については、日付が示されたバージョンのみが本文書に適用されます。
文書; 日付のない文書については、最新バージョン(すべての
この文書には、以下の条項が適用されます。
GB/T 6682 分析実験室用水 - 仕様と試験方法
3 用語、定義、略語
3.1 用語と定義
このドキュメントでは、以下の用語と定義が適用されます。
3.1.1 植物ホルモン関連二次代謝物
植物によって合成され、微生物発酵によって得られる活性物質
または植物の成長、発達、
休眠状態。
3.1.2 生物学活動
植物ホルモン関連の二次的物質の単位濃度の相対値
植物の成長を促進または阻害する代謝産物とその対応する基準、
発達と休眠。
5 試薬または材料
特に指定がない限り、分析試薬のみを使用してください。
5.1 水。GB/T 6682 に規定されるクラス I。
5.2 AuxRE::GUS細胞株。シロイヌナズナコロンビア(Col-0)生態型、
オーキシン応答要素AuxREsはgus遺伝子の1つのコピーを持ち、その数は
生細胞数は1×106個/mL以上です。
5.3 GARE::GUS細胞株。シロイヌナズナコロンビア(Col-0)生態型、
ジベレリン応答要素TATCボックスは、gus遺伝子の1つのコピーを持ち、
生細胞数は1×106個/mL以上です。
5.4 CTKRE::GUS細胞株。シロイヌナズナコロンビア(Col-0)生態型、
サイトカイニン応答要素ARR1ATは、gus遺伝子の単一コピーを持ち、
生細胞数は1×106個/mL以上である。
5.5 細胞株培養液。ショ糖を含まないMS培養培地4.74gを
寒天に950mLの水を加えて溶かし、30.00gのショ糖、0.75gの塩化カルシウムを加え、
硝酸カリウム 0.35g をよく混ぜます。次に、水酸化ナトリウムで pH を 5.60 に調整します。
水を加えて1000mLの定容にする。0.22μmのフィルター膜を使用する。
ろ過・滅菌済み。使用直前に調製できます。
5.6 DPBS、pH 7.4。塩化ナトリウム8.00g、塩化カリウム0.20g、
リン酸水素二ナトリウム十二水和物、および二水素カリウム0.24g
リン酸、水を加えて1000mLに定容し、よく混ぜた後、保存する。
後で使用するために室温に保管してください。同様の市販製品も使用できます。
5.7 抽出液。エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム3.72gを採取する。
二水和物; β-メルカプトエタノール700μL、ポリエチレングリコールオクチルフェノール1mLを加える
エーテルをDPBSで溶解し、1000mLに定容し、よく混ぜて保存する。
後で使用するために室温に保管してください。
5.8 1mmol/L 4-MUGを含む抽出溶液。105.6mgの4-MUGを採取し、
抽出液を加えて300mLに定容し、
使用直前に。
5.9 0.2mg/mL牛血清アルブミン溶液。牛血清タンパク質20.0mgを採取する。
標準物質;DPBSで溶解し、100mLに定容する;
使用直前に調製してください。
5.10 反応停止剤。Na2CO3 21.20gを水に溶かして
1000mLまでの定容。
5.21 GA3標準作業溶液。1mg/mL GA3標準ストック200μLをピペットで採取する。
溶液、細胞株培養液800μLを加え、よく混合して2×10-1 mg/mL GA3を得る。
溶液を10回希釈して2.00×10-4 mg/mL、2.00×10-5 mg/mL、
2.00×10-6 mg/mL GA3標準作業溶液。1mg/mL GA3を632μLピペットで採取する。
標準ストック溶液、細胞株培養液368μLを加え、よく混ぜて
6.32×10-1 mg/mL GA3溶液。10倍希釈して6.32×10-5 mg/mLを得る。
6.32×10-6 mg/mL GA3標準作業溶液。直ちに調製する。
使用前に。
5.22 ZT標準作業溶液。1mg/mL ZT標準ストック200μLをピペットで採取する。
溶液、細胞株培養液800μLを加え、よく混合して2×10-1 mg/mL ZTを得る。
溶液を10回希釈して2.00×10-3 mg/mL、2.00×10-4 mg/mL、
2.00×10-5 mg/mL ZT標準作業溶液。1mg/mL ZT標準を632μLピペットで採取
原液、細胞株培養液368μLを加え、よく混ぜて6.32×10-1を得る。
mg/mL ZT溶液。10倍希釈して6.32×10-4 mg/mL、6.32×10-5
mg/mL ZT標準作業溶液。使用直前に調製してください。
6 装置
6.1 pHメーター:精度0.01。
6.2 電子分析天秤:精度0.1mg、0.01g、1g。
6.3 光インキュベーター:25°C±1°C。
6.4 恒温水槽:37℃。
6.5 細胞培養プレート
6.6 マイクロプレートリーダー:吸光度と蛍光強度を同時に検出できる
時間。
6.7 マイクロプレート:黒。
7 測定手順
7.1 標本の準備
有効物質(または試験対象物質)の質量に応じて変換する
試験サンプルの十分な量の固体サンプルを採取するか、十分な量のピペットで採取する
液体サンプルの量、適切な試薬または水を選択して溶解し、
有効物質(または試験対象物質)溶液を検体として調製する
製品の取扱説明書または製品の特性に従ってテストされる
試験対象物質の濃度はρ0(mg/mL)として記録される。試験の際には、
7.2.3 サンプル中のGUSプロテアーゼ活性の測定
適切な量のサンプル溶液を採取する(総タンパク質含有量が
20μg~200μg)、容量V2を記録する。
1mmol/L 4-MUGを37℃のウォーターバスに入れ、5分後、25分後、45分後、65分後、
85分後に反応液200μLを取り出す。
反応停止試薬を加え、よく混ぜます。その後、200μLをピペットでサンプルウェルに注ぎます。
マイクロプレートに4-MU作業溶液を200μLピペットで入れます(4-MU含有量は200nmol、
それぞれ100nmol、50nmol、25nmol、12.5nmol、6.25nmol)をサンプルに加える。
マイクロプレートのウェル。各サンプル検出マイクロプレートは、
標準物質;そして各標準物質またはサンプル溶液は繰り返し
3つのサンプルウェルに添加し、反応停止試薬をブランクとして使用する。
ゼロを調整するコントロール。励起下での蛍光強度を測定する
波長は365nmで...
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38484-2020 国際電気標準会議
イギリス
国家標準の
中華人民共和国
ICS07.080
21 21
植物の生物学的活性の測定
ホルモン関連二次代謝物 - 細胞学的
方法
発行日: 2020年11月19日
実施日: 2020年11月19日
発行元:国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語、定義、略語 ... 4
4 原則 ... 5
5 試薬または材料...6
6 装置 ... 8
7 測定手順 ... 8
8 再現性 ... 11
付録A(参考)テストデータの記録シート...12
植物の生物学的活性の測定
ホルモン関連二次代謝物 - 細胞学的
方法
1 範囲
この規格は、植物の生物学的活性を測定する方法を規定する。
細胞学的評価によるホルモン関連二次代謝物。
この規格は、オーキシン、サイトカイニン、および
ジベレリンは植物ホルモン関連の二次代謝産物です。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の記載された文書については、日付が示されたバージョンのみが本文書に適用されます。
文書; 日付のない文書については、最新バージョン(すべての
この文書には、以下の条項が適用されます。
GB/T 6682 分析実験室用水 - 仕様と試験方法
3 用語、定義、略語
3.1 用語と定義
このドキュメントでは、以下の用語と定義が適用されます。
3.1.1 植物ホルモン関連二次代謝物
植物によって合成され、微生物発酵によって得られる活性物質
または植物の成長、発達、
休眠状態。
3.1.2 生物学活動
植物ホルモン関連の二次的物質の単位濃度の相対値
植物の成長を促進または阻害する代謝産物とその対応する基準、
発達と休眠。
5 試薬または材料
特に指定がない限り、分析試薬のみを使用してください。
5.1 水。GB/T 6682 に規定されるクラス I。
5.2 AuxRE::GUS細胞株。シロイヌナズナコロンビア(Col-0)生態型、
オーキシン応答要素AuxREsはgus遺伝子の1つのコピーを持ち、その数は
生細胞数は1×106個/mL以上です。
5.3 GARE::GUS細胞株。シロイヌナズナコロンビア(Col-0)生態型、
ジベレリン応答要素TATCボックスは、gus遺伝子の1つのコピーを持ち、
生細胞数は1×106個/mL以上です。
5.4 CTKRE::GUS細胞株。シロイヌナズナコロンビア(Col-0)生態型、
サイトカイニン応答要素ARR1ATは、gus遺伝子の単一コピーを持ち、
生細胞数は1×106個/mL以上である。
5.5 細胞株培養液。ショ糖を含まないMS培養培地4.74gを
寒天に950mLの水を加えて溶かし、30.00gのショ糖、0.75gの塩化カルシウムを加え、
硝酸カリウム 0.35g をよく混ぜます。次に、水酸化ナトリウムで pH を 5.60 に調整します。
水を加えて1000mLの定容にする。0.22μmのフィルター膜を使用する。
ろ過・滅菌済み。使用直前に調製できます。
5.6 DPBS、pH 7.4。塩化ナトリウム8.00g、塩化カリウム0.20g、
リン酸水素二ナトリウム十二水和物、および二水素カリウム0.24g
リン酸、水を加えて1000mLに定容し、よく混ぜた後、保存する。
後で使用するために室温に保管してください。同様の市販製品も使用できます。
5.7 抽出液。エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム3.72gを採取する。
二水和物; β-メルカプトエタノール700μL、ポリエチレングリコールオクチルフェノール1mLを加える
エーテルをDPBSで溶解し、1000mLに定容し、よく混ぜて保存する。
後で使用するために室温に保管してください。
5.8 1mmol/L 4-MUGを含む抽出溶液。105.6mgの4-MUGを採取し、
抽出液を加えて300mLに定容し、
使用直前に。
5.9 0.2mg/mL牛血清アルブミン溶液。牛血清タンパク質20.0mgを採取する。
標準物質;DPBSで溶解し、100mLに定容する;
使用直前に調製してください。
5.10 反応停止剤。Na2CO3 21.20gを水に溶かして
1000mLまでの定容。
5.21 GA3標準作業溶液。1mg/mL GA3標準ストック200μLをピペットで採取する。
溶液、細胞株培養液800μLを加え、よく混合して2×10-1 mg/mL GA3を得る。
溶液を10回希釈して2.00×10-4 mg/mL、2.00×10-5 mg/mL、
2.00×10-6 mg/mL GA3標準作業溶液。1mg/mL GA3を632μLピペットで採取する。
標準ストック溶液、細胞株培養液368μLを加え、よく混ぜて
6.32×10-1 mg/mL GA3溶液。10倍希釈して6.32×10-5 mg/mLを得る。
6.32×10-6 mg/mL GA3標準作業溶液。直ちに調製する。
使用前に。
5.22 ZT標準作業溶液。1mg/mL ZT標準ストック200μLをピペットで採取する。
溶液、細胞株培養液800μLを加え、よく混合して2×10-1 mg/mL ZTを得る。
溶液を10回希釈して2.00×10-3 mg/mL、2.00×10-4 mg/mL、
2.00×10-5 mg/mL ZT標準作業溶液。1mg/mL ZT標準を632μLピペットで採取
原液、細胞株培養液368μLを加え、よく混ぜて6.32×10-1を得る。
mg/mL ZT溶液。10倍希釈して6.32×10-4 mg/mL、6.32×10-5
mg/mL ZT標準作業溶液。使用直前に調製してください。
6 装置
6.1 pHメーター:精度0.01。
6.2 電子分析天秤:精度0.1mg、0.01g、1g。
6.3 光インキュベーター:25°C±1°C。
6.4 恒温水槽:37℃。
6.5 細胞培養プレート
6.6 マイクロプレートリーダー:吸光度と蛍光強度を同時に検出できる
時間。
6.7 マイクロプレート:黒。
7 測定手順
7.1 標本の準備
有効物質(または試験対象物質)の質量に応じて変換する
試験サンプルの十分な量の固体サンプルを採取するか、十分な量のピペットで採取する
液体サンプルの量、適切な試薬または水を選択して溶解し、
有効物質(または試験対象物質)溶液を検体として調製する
製品の取扱説明書または製品の特性に従ってテストされる
試験対象物質の濃度はρ0(mg/mL)として記録される。試験の際には、
7.2.3 サンプル中のGUSプロテアーゼ活性の測定
適切な量のサンプル溶液を採取する(総タンパク質含有量が
20μg~200μg)、容量V2を記録する。
1mmol/L 4-MUGを37℃のウォーターバスに入れ、5分後、25分後、45分後、65分後、
85分後に反応液200μLを取り出す。
反応停止試薬を加え、よく混ぜます。その後、200μLをピペットでサンプルウェルに注ぎます。
マイクロプレートに4-MU作業溶液を200μLピペットで入れます(4-MU含有量は200nmol、
それぞれ100nmol、50nmol、25nmol、12.5nmol、6.25nmol)をサンプルに加える。
マイクロプレートのウェル。各サンプル検出マイクロプレートは、
標準物質;そして各標準物質またはサンプル溶液は繰り返し
3つのサンプルウェルに添加し、反応停止試薬をブランクとして使用する。
ゼロを調整するコントロール。励起下での蛍光強度を測定する
波長は365nmで...
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