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GB/T 38132-2019 英語 PDF (GBT38132-2019)
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GB/T 38132-2019: デジタルPCR法による遺伝子組み換え植物の定量的判定
38132-2019 国際電気標準会議
国家標準の
中華人民共和国
ICS07.080
40 円
遺伝子組み換えの定量的判定
デジタルPCR法による植物
発行日: 2019年10月18日
実施日: 2019年10月18日
発行元:国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局
中国。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語と定義、略語...4
4 原則 ... 5
5 試薬と材料 ... 6
6 器具および装置 ... 7
7 操作手順 ... 7
8 結果の分析とプレゼンテーション ... 9
付録A(参考)遺伝子組み換え植物の特定増幅
シーケンス...11
遺伝子組み換えの定量的判定
デジタルPCR法による植物
1 範囲
この規格は、遺伝子組み換え作物の定量分析を規定する。
デジタルPCR法による植物の検出。
この規格は、定量分析のためのデジタルPCR法に適用される。
遺伝子組み換えトウモロコシMON810、MON89034、MIR162、遺伝子組み換え
遺伝子組み換え大豆GTS-40-3-2、遺伝子組み換え米KMDイベント、遺伝子組み換え
遺伝子組み換え綿花GHB119および種子中の遺伝子組み換えアブラナRT73
物理的に処理された種子。
この方法の定量検出限界は0.1%(質量分率)です。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の付いた参照については、この文書には日付の付いたバージョンのみが適用されます。
日付のない参考文献については、最新版(すべての修正を含む)がこれに適用される。
書類。
GB/T 6682、分析実験室用水 - 仕様と試験
方法
GB/T 19495.1、遺伝子組み換え生物およびその派生物の検出
製品 - 一般的な要件と定義
GB/T 19495.3、遺伝子組み換え生物およびその派生物の検出
製品 - 核酸抽出
GB/T 19495.7、遺伝子組み換え生物およびその派生物の検出
製品 - サンプリングおよびサンプル準備の方法
SN/T 4853、遺伝子組み換え米の定量検出 - デジタルPCR
3 用語と定義、略語
3.1 用語と定義
この文書には以下の用語と定義が適用されます。
3.1.1 イベント固有のシーケンス
再結合して生成される隣接結合配列は、
外来 DNA 断片が受容作物のゲノムに挿入されます。
3.2 略語
この文書では以下の略語が適用されます。
Adh-1: アルコール脱水素酵素1
Adhc: アルコール脱水素酵素C遺伝子
PCR:ポリメラーゼ連鎖反応
PEP: ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子
PLD: ホスホリパーゼD遺伝子
4 原則
デジタルPCRの技術的原理は、元のPCR反応をセグメント化することであり、
システムを増幅し、すべての小さな反応システムを検出します。
反応システムの限定されたセグメント化により、反応システム全体を
核酸阻害剤に対する耐性が高まり、より安定して、正確に、
遺伝子組み換え生物の正確な識別を迅速に行う
痕跡。
現在、デジタルPCRにはチップ型デジタルPCRと液滴型デジタルPCRがある。
PCR。チップ型デジタルPCRは、マイクロ流体チップを使用して、
元の反応システムのセグメンテーション。このセグメンテーション法は、
優れた安定性と均一性の利点がありますが、テストコストが比較的高くなります。
液滴型デジタルPCRは、油中水系を生成し、
反応システムのセグメンテーション。このセグメンテーション法は高速
応答速度が向上し、セグメンテーションコストが削減されます。
遺伝子組み換え植物の定量的判定を実現するために
デジタルPCRでは、この標準は、
外因性遺伝子(イベント特異的配列)と内因性遺伝子
デジタルPCR増幅反応による遺伝子組み換え植物。
外来遺伝子のコピー数と
サンプルDNA中の内因性遺伝子は、
サンプル内の対応する遺伝子組み換え植物。
7.5.2 デジタルPCR反応手順
デジタルPCR反応手順を表4および5に示します。
7.5.3 コントロールデジタルPCR反応の設定
試験では陽性コントロール、陰性コントロール、ブランクコントロールを設定する必要があります。
イベント特有の遺伝子を含む遺伝子組み換え植物のゲノムDNAを使用する
陽性対照として配列を使用する。非遺伝的
ネガティブコントロールと同じ内因性遺伝子を含む改変植物。
水をブランクコントロールとして使用します。各コントロールPCR反応システムでは、
テンプレート、残りのコンポーネント、PCR反応条件は、
7.5.1 および 7.5.2 と同じです。
8 結果の分析とプレゼンテーション
8.1 品質管理
エンドポイント蛍光値に応じて閾値を設定します。
デジタルPCRの結果におけるネガティブコントロール。閾値は、
陰性反応ミクロセルと陽性反応ミクロセルを区別する
同じサンプルで。
ネガティブコントロールには内因性遺伝子増幅があり、ネガティブコントロールには
コントロールとブランクコントロールには外因性遺伝子増幅はありません。
増幅並列テスト結果の相対標準偏差
(遺伝子組み換え事象の割合)は25%以下でなければならない。
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38132-2019 国際電気標準会議
国家標準の
中華人民共和国
ICS07.080
40 円
遺伝子組み換えの定量的判定
デジタルPCR法による植物
発行日: 2019年10月18日
実施日: 2019年10月18日
発行元:国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局
中国。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語と定義、略語...4
4 原則 ... 5
5 試薬と材料 ... 6
6 器具および装置 ... 7
7 操作手順 ... 7
8 結果の分析とプレゼンテーション ... 9
付録A(参考)遺伝子組み換え植物の特定増幅
シーケンス...11
遺伝子組み換えの定量的判定
デジタルPCR法による植物
1 範囲
この規格は、遺伝子組み換え作物の定量分析を規定する。
デジタルPCR法による植物の検出。
この規格は、定量分析のためのデジタルPCR法に適用される。
遺伝子組み換えトウモロコシMON810、MON89034、MIR162、遺伝子組み換え
遺伝子組み換え大豆GTS-40-3-2、遺伝子組み換え米KMDイベント、遺伝子組み換え
遺伝子組み換え綿花GHB119および種子中の遺伝子組み換えアブラナRT73
物理的に処理された種子。
この方法の定量検出限界は0.1%(質量分率)です。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の付いた参照については、この文書には日付の付いたバージョンのみが適用されます。
日付のない参考文献については、最新版(すべての修正を含む)がこれに適用される。
書類。
GB/T 6682、分析実験室用水 - 仕様と試験
方法
GB/T 19495.1、遺伝子組み換え生物およびその派生物の検出
製品 - 一般的な要件と定義
GB/T 19495.3、遺伝子組み換え生物およびその派生物の検出
製品 - 核酸抽出
GB/T 19495.7、遺伝子組み換え生物およびその派生物の検出
製品 - サンプリングおよびサンプル準備の方法
SN/T 4853、遺伝子組み換え米の定量検出 - デジタルPCR
3 用語と定義、略語
3.1 用語と定義
この文書には以下の用語と定義が適用されます。
3.1.1 イベント固有のシーケンス
再結合して生成される隣接結合配列は、
外来 DNA 断片が受容作物のゲノムに挿入されます。
3.2 略語
この文書では以下の略語が適用されます。
Adh-1: アルコール脱水素酵素1
Adhc: アルコール脱水素酵素C遺伝子
PCR:ポリメラーゼ連鎖反応
PEP: ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子
PLD: ホスホリパーゼD遺伝子
4 原則
デジタルPCRの技術的原理は、元のPCR反応をセグメント化することであり、
システムを増幅し、すべての小さな反応システムを検出します。
反応システムの限定されたセグメント化により、反応システム全体を
核酸阻害剤に対する耐性が高まり、より安定して、正確に、
遺伝子組み換え生物の正確な識別を迅速に行う
痕跡。
現在、デジタルPCRにはチップ型デジタルPCRと液滴型デジタルPCRがある。
PCR。チップ型デジタルPCRは、マイクロ流体チップを使用して、
元の反応システムのセグメンテーション。このセグメンテーション法は、
優れた安定性と均一性の利点がありますが、テストコストが比較的高くなります。
液滴型デジタルPCRは、油中水系を生成し、
反応システムのセグメンテーション。このセグメンテーション法は高速
応答速度が向上し、セグメンテーションコストが削減されます。
遺伝子組み換え植物の定量的判定を実現するために
デジタルPCRでは、この標準は、
外因性遺伝子(イベント特異的配列)と内因性遺伝子
デジタルPCR増幅反応による遺伝子組み換え植物。
外来遺伝子のコピー数と
サンプルDNA中の内因性遺伝子は、
サンプル内の対応する遺伝子組み換え植物。
7.5.2 デジタルPCR反応手順
デジタルPCR反応手順を表4および5に示します。
7.5.3 コントロールデジタルPCR反応の設定
試験では陽性コントロール、陰性コントロール、ブランクコントロールを設定する必要があります。
イベント特有の遺伝子を含む遺伝子組み換え植物のゲノムDNAを使用する
陽性対照として配列を使用する。非遺伝的
ネガティブコントロールと同じ内因性遺伝子を含む改変植物。
水をブランクコントロールとして使用します。各コントロールPCR反応システムでは、
テンプレート、残りのコンポーネント、PCR反応条件は、
7.5.1 および 7.5.2 と同じです。
8 結果の分析とプレゼンテーション
8.1 品質管理
エンドポイント蛍光値に応じて閾値を設定します。
デジタルPCRの結果におけるネガティブコントロール。閾値は、
陰性反応ミクロセルと陽性反応ミクロセルを区別する
同じサンプルで。
ネガティブコントロールには内因性遺伝子増幅があり、ネガティブコントロールには
コントロールとブランクコントロールには外因性遺伝子増幅はありません。
増幅並列テスト結果の相対標準偏差
(遺伝子組み換え事象の割合)は25%以下でなければならない。
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