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GB/T 33526-2017 英語 PDF (GBT33526-2017)
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GB/T 33526-2017: デジタルPCRによる遺伝子組み換え生物の検出方法
33526-2017 国際電気標準会議
国家標準の
中華人民共和国
ICS07.080
40 円
遺伝子組み換え生物検出法
デジタルPCR
発行日: 2017年2月28日
実施日: 2017年9月1日
発行元:国家品質監督検査総局
検疫;
中華人民共和国標準化管理局。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語と定義 ... 4
4 原則 ... 5
5 試薬と材料 ... 5
6 装置...6
7 操作手順 ... 7
8 結果の分析と表現 ... 9
遺伝子組み換え生物検出法
デジタルPCR
1 範囲
この規格は、遺伝子組み換え作物の検出のためのデジタルPCR法を規定する。
コンポーネント。
この規格は、遺伝子組み換え植物のデジタルPCR検出に適用され、
トウモロコシ、大豆、菜種、米、ジャガイモ、アルファルファ、綿花などの成分。
この規格で検出できる下限値は 0.1% (質量分率) です。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の記載された文書については、日付が示されたバージョンのみが本文書に適用されます。
文書; 日付のない文書については、最新バージョン(すべての
この文書には、以下の条項(修正条項など)が適用されます。
GB/T 6682 実験室用水 – 仕様
GB/T 19495.1 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出
- 一般的な要件と定義
GB/T 19495.3 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出
- 核酸抽出
GB/T 19495.7 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出
サンプリングとサンプル調製の方法
3 用語と定義
このドキュメントでは、以下の用語と定義が適用されます。
3.1 18srRNA遺伝子
18srDNA から転写され、細胞リボソームの構成要素となります。
3.2 CaMV35sプロモーター
カリフラワーモザイクウイルスの35sプロモーターです。
3.3 NOSターミネーター
ノパリン合成酵素遺伝子 NOS のターミネーターです。
4 原則
デジタルPCRの技術的原理は、元のPCR反応システムをセグメント化することです。
そして、すべての小さな反応システムを増幅して検出します。限られた
反応システムを分割することで、反応システム全体の耐性が向上する。
核酸阻害因子に、より正確に、安定して、正確に同定する
微量の遺伝子組み換え成分。
現在、デジタルPCRの実装には、チップ型デジタルPCRとマイクロ
液滴型デジタルPCR。その中でもチップ型デジタルPCRはマイクロ流体チップを使用する。
元の反応システムをセグメント化する。このセグメント化は、優れた安定性を特徴とする。
均一性は高いが、このセグメンテーション方法の実験コストは比較的高い。
マイクロドロップレット型デジタルPCRプラットフォームは、反応システムを次のようにセグメント化します。
小さな油中水システムを生成する。このセグメンテーション方法の利点は
応答速度が速く、セグメンテーションコストが低いという利点があるが、相対的に言えば、安定性は
このセグメンテーション方法の信頼性は比較的低く、データ分析の要件は
比較的高い。デジタルPCRのプラットフォームの違いにより、データ
異なるデジタルPCRプラットフォームの共同分析も、
現在のデジタルPCR検出方法の開発。
この標準は、ユニバーサルスクリーニングエレメントCaMV35sプロモーター用に設計されており、
NOSターミネーターとデジタルPCR用の特定のプライマーとプローブを選択します
増幅;CaMV35sプロモーターの外来スクリーニング要素を決定する
増幅結果に基づいてNOSターミネーターを同定した。さらに、
チップ型デジタルPCRとマイクロドロップレット型デジタルPCRの共同比較
標準的な方法では、両方のプラットフォームで同じ検出目的を達成できます。
5 試薬と材料
特に指定がない限り、分析試薬とレベルIの水のみを使用してください。
GB/T 6682に準拠。
5.1 DNA抽出キット
異なるサンプルマトリックスには異なるゲノム抽出キットを選択することをお勧めします。
b) ピペットの範囲は0.5μL~10μLと0.1μL~2.5μL、および10μLの対応するピペットです。
ヒント。
7 操作手順
7.1 サンプリング
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.7.
7.2 サンプルの準備
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.7.
7.3 サンプル前処理
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.3.
7.4 DNAテンプレートの調製
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.3.
7.5 デジタルPCR増幅法
7.5.1 サンプルデジタルPCR反応
7.5.1.1 内部標準遺伝子デジタルPCR反応
各サンプルの内部標準遺伝子デジタルPCR反応は3つに分かれています。
デジタルPCR反応システムは、
成分と最終濃度は表1の通りです。反応の構成後
システムが完成したら、反応システムをセグメント化する。チップベースのデジタルPCR
この手順はマイクロ流体チップを通じて実現され、マイクロ液滴ベースのデジタル
PCRは油中水構造を形成することでシステムのセグメンテーションを実現します。
手順は、さまざまなデジタル PCR プラットフォームの指示に従って実行されます。
デジタルPCR反応の有効セグメンテーション係数は、
理論的なセグメンテーション係数の60%未満。
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国家標準の
中華人民共和国
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40 円
遺伝子組み換え生物検出法
デジタルPCR
発行日: 2017年2月28日
実施日: 2017年9月1日
発行元:国家品質監督検査総局
検疫;
中華人民共和国標準化管理局。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語と定義 ... 4
4 原則 ... 5
5 試薬と材料 ... 5
6 装置...6
7 操作手順 ... 7
8 結果の分析と表現 ... 9
遺伝子組み換え生物検出法
デジタルPCR
1 範囲
この規格は、遺伝子組み換え作物の検出のためのデジタルPCR法を規定する。
コンポーネント。
この規格は、遺伝子組み換え植物のデジタルPCR検出に適用され、
トウモロコシ、大豆、菜種、米、ジャガイモ、アルファルファ、綿花などの成分。
この規格で検出できる下限値は 0.1% (質量分率) です。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の記載された文書については、日付が示されたバージョンのみが本文書に適用されます。
文書; 日付のない文書については、最新バージョン(すべての
この文書には、以下の条項(修正条項など)が適用されます。
GB/T 6682 実験室用水 – 仕様
GB/T 19495.1 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出
- 一般的な要件と定義
GB/T 19495.3 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出
- 核酸抽出
GB/T 19495.7 遺伝子組み換え生物および派生製品の検出
サンプリングとサンプル調製の方法
3 用語と定義
このドキュメントでは、以下の用語と定義が適用されます。
3.1 18srRNA遺伝子
18srDNA から転写され、細胞リボソームの構成要素となります。
3.2 CaMV35sプロモーター
カリフラワーモザイクウイルスの35sプロモーターです。
3.3 NOSターミネーター
ノパリン合成酵素遺伝子 NOS のターミネーターです。
4 原則
デジタルPCRの技術的原理は、元のPCR反応システムをセグメント化することです。
そして、すべての小さな反応システムを増幅して検出します。限られた
反応システムを分割することで、反応システム全体の耐性が向上する。
核酸阻害因子に、より正確に、安定して、正確に同定する
微量の遺伝子組み換え成分。
現在、デジタルPCRの実装には、チップ型デジタルPCRとマイクロ
液滴型デジタルPCR。その中でもチップ型デジタルPCRはマイクロ流体チップを使用する。
元の反応システムをセグメント化する。このセグメント化は、優れた安定性を特徴とする。
均一性は高いが、このセグメンテーション方法の実験コストは比較的高い。
マイクロドロップレット型デジタルPCRプラットフォームは、反応システムを次のようにセグメント化します。
小さな油中水システムを生成する。このセグメンテーション方法の利点は
応答速度が速く、セグメンテーションコストが低いという利点があるが、相対的に言えば、安定性は
このセグメンテーション方法の信頼性は比較的低く、データ分析の要件は
比較的高い。デジタルPCRのプラットフォームの違いにより、データ
異なるデジタルPCRプラットフォームの共同分析も、
現在のデジタルPCR検出方法の開発。
この標準は、ユニバーサルスクリーニングエレメントCaMV35sプロモーター用に設計されており、
NOSターミネーターとデジタルPCR用の特定のプライマーとプローブを選択します
増幅;CaMV35sプロモーターの外来スクリーニング要素を決定する
増幅結果に基づいてNOSターミネーターを同定した。さらに、
チップ型デジタルPCRとマイクロドロップレット型デジタルPCRの共同比較
標準的な方法では、両方のプラットフォームで同じ検出目的を達成できます。
5 試薬と材料
特に指定がない限り、分析試薬とレベルIの水のみを使用してください。
GB/T 6682に準拠。
5.1 DNA抽出キット
異なるサンプルマトリックスには異なるゲノム抽出キットを選択することをお勧めします。
b) ピペットの範囲は0.5μL~10μLと0.1μL~2.5μL、および10μLの対応するピペットです。
ヒント。
7 操作手順
7.1 サンプリング
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.7.
7.2 サンプルの準備
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.7.
7.3 サンプル前処理
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.3.
7.4 DNAテンプレートの調製
GB/T 19495.1およびGB/Tの規定に従って実施されるものとする。
19495.3.
7.5 デジタルPCR増幅法
7.5.1 サンプルデジタルPCR反応
7.5.1.1 内部標準遺伝子デジタルPCR反応
各サンプルの内部標準遺伝子デジタルPCR反応は3つに分かれています。
デジタルPCR反応システムは、
成分と最終濃度は表1の通りです。反応の構成後
システムが完成したら、反応システムをセグメント化する。チップベースのデジタルPCR
この手順はマイクロ流体チップを通じて実現され、マイクロ液滴ベースのデジタル
PCRは油中水構造を形成することでシステムのセグメンテーションを実現します。
手順は、さまざまなデジタル PCR プラットフォームの指示に従って実行されます。
デジタルPCR反応の有効セグメンテーション係数は、
理論的なセグメンテーション係数の60%未満。
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