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GB/T 14701-2019 英語 PDF (GBT14701-2019)
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GB/T 14701-2019: 飼料中のビタミンB2の測定
GB/T 14701-2019
国家標準の
中華人民共和国
ICS65.120
B46
GB/T 14701-2002 の置き換え
飼料中のビタミンB2の測定
発行日: 2019年6月4日
実施日: 2020年1月1日
発行元:国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局
中国。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 方法1:蛍光分光光度法...4
4 方法2:高速液体クロマトグラフィー...8
付録A(参考)ビタミンB2標準クロマトグラム...13
飼料中のビタミンB2の測定
1 範囲
この規格は、蛍光分光光度計と高感度分光光度計の測定法を規定する。
ビタミンB2(すなわち
飼料中のリボフラビン(C17H20N10)
この規格の方法1は、
動物および植物の飼料原料、配合飼料および濃縮飼料。
定量限界は0.25 mg/kgです。
この規格の方法2は、ビタミンB2の測定に適用できる。
ビタミン配合飼料、複合配合飼料、濃縮飼料などがあります。
蛍光検出器で検出した場合、定量限界は5mg/kgである。
紫外線検出器で検出した場合、定量限界は10 mg/kgです。
濃縮飼料中のビタミンB2の測定には、方法1が用いられる。
仲裁法;ビタミンプレミックス飼料中のビタミンB2の測定用
添加剤プレミックスフィード、高性能液体クロマトグラフィー
方法2の蛍光検出法は仲裁法である。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の付いた参照については、この文書には日付の付いたバージョンのみが適用されます。
日付のない参考文献については、最新版(すべての修正を含む)がこれに適用される。
書類。
GB/T 6682、分析実験室用水。仕様と試験方法
GB/T 14699.1、飼料原料。サンプリング
GB/T 20195、動物飼料原料。試験サンプルの準備
3 方法1:蛍光分光法
3.1 原則
ビタミンB2(リボフラビン)は440nmの励起下で緑色の蛍光を発する。
紫外線; その蛍光強度はリボフラビン含有量に比例する
特定の濃度範囲で、亜ジチオン酸ナトリウムを使用してリボフラビンを
非蛍光物質; の差の比率を使用します
3.2.11 フルオレセイン標準溶液
3.2.11.1 フルオレセイン原液:フルオレセイン0.050gを量り、水で希釈する。
1000mLに希釈し、茶色の瓶に入れて冷蔵庫で2℃~8℃で保存します。
保存してください。溶液には 50 μg/mL のフルオレセインが含まれています。
3.2.11.2 フルオレセイン標準作業溶液:フルオレセインストック1mLを採取する
溶液(3.2.11.1)を水で1000mLに希釈し、茶色の瓶に入れて
冷蔵庫で2℃~8℃で保存してください。この溶液には0.05μg/mLの
フルオレセイン。
3.2.12 ブロモクレゾールグリーンpH指示薬
ブロモクレゾールグリーン0.1gをとり、水酸化ナトリウム溶液2.8mLを加える。
(3.2.1)を溶かし、水を加えて200mLに希釈する。色が変わる
範囲はpH3.6〜5.2です。
3.3 器具および装置
3.3.1 分析天秤:感度0.000 1g。
3.3.2 電気恒温水槽
3.3.3 ストッパー付きガラス目盛り試験管:15mL。
3.3.4、蛍光分光光度計。
3.4 サンプルの準備
GB/T 14699.1の規定に従って、少なくとも500gの
代表的なサンプル。四等分して100gに減らし、サンプルを準備する
GB/T 20195に従って、粉砕し、0.425mmのふるいにかけ、よく混ぜ、
密封容器に入れて、日光を避けて低温で保管してください。
3.5 テスト手順
以下の操作は強い光にさらされることなく行う必要があります。
3.5.1 サンプル溶液の調製
飼料原料、配合飼料、
100mLの茶色い三角フラスコに濃縮飼料を入れ、65mLの塩酸を加えます。
酸溶液(3.2.3)を沸騰湯浴で30分間煮沸する。
加熱中は、5分~10分ごとに三角フラスコを振って、
サンプルが凝集するのを防ぎます。室温まで冷却した後、
水酸化ナトリウム溶液(3.2.2)を加えてpHを6.0〜6.5に調整し、直ちに
塩酸溶液(3.2.4)でpHを4.5に調整する(ブロモクレゾールグリーン
指示薬が草の緑色に変わる)。100 mL の茶色のメスフラスコに移す。
m0 - 添加されたビタミンB2標準量(マイクログラム(μg)単位)
V - 試験溶液の初期容量(ミリリットル(mL))
V1 - 試験中に採取された試験溶液の体積(ミリリットル(mL)単位)。
m -- サンプルの質量(グラム(g))
n -- 希釈率;
の値は0.66~1.5でなければならない。それ以外の場合、
サンプル溶液は調整され、サンプル量または希釈率は
調整されるものとする。
判定結果は、平行線の算術平均で表される。
3 つの重要な数字を保持して決定します。
3.7 精度
ビタミンB2含有量が5mg/kg未満の飼料の場合、
得られた2つの独立した決定結果の間
繰り返し条件であり、その算術平均が15%以下である
2つの測定値の算術平均。
ビタミンB2含有量が5mg/kg以上50mg/kg未満の飼料の場合、
2つの独立した決定結果の差は
繰り返し条件で得られたものであり、その算術平均は以下である
2つの測定値の算術平均の10%
ビタミンB2含有量が50mg/kgを超える飼料の場合、
得られた2つの独立した決定結果の間
繰り返し条件であり、その算術平均が5%以下である
2つの測定値の算術平均。
4 方法2: 高速液体クロマトグラフィー
4.1 原則
サンプル中のリボフラビンを酸性溶液で超音波抽出した後、
遠心分離して濾過したサンプル溶液を高性能液体クロマトグラフィーに注入する。
クロマトグラフィー逆相クロマトグラフィー分離システム。
UV検出器(ダイオードマトリックス検出器)または蛍光検出器を使用して検出する。
ビタミンB2の含有量を計算するための外部標準法。
4.2 試薬または溶液
4.2.10.2 ビタミンB2標準溶液:ビタミンB2の測定用
プレミックス飼料サンプル、標準原液の標準溶液
ビタミンB2(4.2.10.1)は、上部の標準溶液として直接使用することができます。
機械; 複合プレミックス飼料、濃縮飼料の測定用
サンプルは、ビタミンB2標準原液(4.2.10.1)5mLを正確に吸収する。
50mLの茶色のメスフラスコに入れ、抽出液で標線まで希釈する。
標準作業溶液中のビタミンB2の濃度は5μg/mLです。希釈
分析の前に。
4.3 器具および装置
4.3.1 高速液体クロマトグラフ:UV検出器(ダイオードマトリックス
検出器)または蛍光検出器。
4.3.2 pHメーター:温度制御機能付き、精度0.01。
4.3.3 恒温水槽:0℃~100℃。
4.3.4 ニードルフィルター:0.45μmの水フィルター付き。
4.4 サンプルの準備
GB/T 14699.1の規定に従ってサンプルを採取し、少なくとも500gの
代表的なサンプル。4等分して100gに減らします。
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飼料中のビタミンB2の測定
発行日: 2019年6月4日
実施日: 2020年1月1日
発行元:国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局
中国。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 方法1:蛍光分光光度法...4
4 方法2:高速液体クロマトグラフィー...8
付録A(参考)ビタミンB2標準クロマトグラム...13
飼料中のビタミンB2の測定
1 範囲
この規格は、蛍光分光光度計と高感度分光光度計の測定法を規定する。
ビタミンB2(すなわち
飼料中のリボフラビン(C17H20N10)
この規格の方法1は、
動物および植物の飼料原料、配合飼料および濃縮飼料。
定量限界は0.25 mg/kgです。
この規格の方法2は、ビタミンB2の測定に適用できる。
ビタミン配合飼料、複合配合飼料、濃縮飼料などがあります。
蛍光検出器で検出した場合、定量限界は5mg/kgである。
紫外線検出器で検出した場合、定量限界は10 mg/kgです。
濃縮飼料中のビタミンB2の測定には、方法1が用いられる。
仲裁法;ビタミンプレミックス飼料中のビタミンB2の測定用
添加剤プレミックスフィード、高性能液体クロマトグラフィー
方法2の蛍光検出法は仲裁法である。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の付いた参照については、この文書には日付の付いたバージョンのみが適用されます。
日付のない参考文献については、最新版(すべての修正を含む)がこれに適用される。
書類。
GB/T 6682、分析実験室用水。仕様と試験方法
GB/T 14699.1、飼料原料。サンプリング
GB/T 20195、動物飼料原料。試験サンプルの準備
3 方法1:蛍光分光法
3.1 原則
ビタミンB2(リボフラビン)は440nmの励起下で緑色の蛍光を発する。
紫外線; その蛍光強度はリボフラビン含有量に比例する
特定の濃度範囲で、亜ジチオン酸ナトリウムを使用してリボフラビンを
非蛍光物質; の差の比率を使用します
3.2.11 フルオレセイン標準溶液
3.2.11.1 フルオレセイン原液:フルオレセイン0.050gを量り、水で希釈する。
1000mLに希釈し、茶色の瓶に入れて冷蔵庫で2℃~8℃で保存します。
保存してください。溶液には 50 μg/mL のフルオレセインが含まれています。
3.2.11.2 フルオレセイン標準作業溶液:フルオレセインストック1mLを採取する
溶液(3.2.11.1)を水で1000mLに希釈し、茶色の瓶に入れて
冷蔵庫で2℃~8℃で保存してください。この溶液には0.05μg/mLの
フルオレセイン。
3.2.12 ブロモクレゾールグリーンpH指示薬
ブロモクレゾールグリーン0.1gをとり、水酸化ナトリウム溶液2.8mLを加える。
(3.2.1)を溶かし、水を加えて200mLに希釈する。色が変わる
範囲はpH3.6〜5.2です。
3.3 器具および装置
3.3.1 分析天秤:感度0.000 1g。
3.3.2 電気恒温水槽
3.3.3 ストッパー付きガラス目盛り試験管:15mL。
3.3.4、蛍光分光光度計。
3.4 サンプルの準備
GB/T 14699.1の規定に従って、少なくとも500gの
代表的なサンプル。四等分して100gに減らし、サンプルを準備する
GB/T 20195に従って、粉砕し、0.425mmのふるいにかけ、よく混ぜ、
密封容器に入れて、日光を避けて低温で保管してください。
3.5 テスト手順
以下の操作は強い光にさらされることなく行う必要があります。
3.5.1 サンプル溶液の調製
飼料原料、配合飼料、
100mLの茶色い三角フラスコに濃縮飼料を入れ、65mLの塩酸を加えます。
酸溶液(3.2.3)を沸騰湯浴で30分間煮沸する。
加熱中は、5分~10分ごとに三角フラスコを振って、
サンプルが凝集するのを防ぎます。室温まで冷却した後、
水酸化ナトリウム溶液(3.2.2)を加えてpHを6.0〜6.5に調整し、直ちに
塩酸溶液(3.2.4)でpHを4.5に調整する(ブロモクレゾールグリーン
指示薬が草の緑色に変わる)。100 mL の茶色のメスフラスコに移す。
m0 - 添加されたビタミンB2標準量(マイクログラム(μg)単位)
V - 試験溶液の初期容量(ミリリットル(mL))
V1 - 試験中に採取された試験溶液の体積(ミリリットル(mL)単位)。
m -- サンプルの質量(グラム(g))
n -- 希釈率;
の値は0.66~1.5でなければならない。それ以外の場合、
サンプル溶液は調整され、サンプル量または希釈率は
調整されるものとする。
判定結果は、平行線の算術平均で表される。
3 つの重要な数字を保持して決定します。
3.7 精度
ビタミンB2含有量が5mg/kg未満の飼料の場合、
得られた2つの独立した決定結果の間
繰り返し条件であり、その算術平均が15%以下である
2つの測定値の算術平均。
ビタミンB2含有量が5mg/kg以上50mg/kg未満の飼料の場合、
2つの独立した決定結果の差は
繰り返し条件で得られたものであり、その算術平均は以下である
2つの測定値の算術平均の10%
ビタミンB2含有量が50mg/kgを超える飼料の場合、
得られた2つの独立した決定結果の間
繰り返し条件であり、その算術平均が5%以下である
2つの測定値の算術平均。
4 方法2: 高速液体クロマトグラフィー
4.1 原則
サンプル中のリボフラビンを酸性溶液で超音波抽出した後、
遠心分離して濾過したサンプル溶液を高性能液体クロマトグラフィーに注入する。
クロマトグラフィー逆相クロマトグラフィー分離システム。
UV検出器(ダイオードマトリックス検出器)または蛍光検出器を使用して検出する。
ビタミンB2の含有量を計算するための外部標準法。
4.2 試薬または溶液
4.2.10.2 ビタミンB2標準溶液:ビタミンB2の測定用
プレミックス飼料サンプル、標準原液の標準溶液
ビタミンB2(4.2.10.1)は、上部の標準溶液として直接使用することができます。
機械; 複合プレミックス飼料、濃縮飼料の測定用
サンプルは、ビタミンB2標準原液(4.2.10.1)5mLを正確に吸収する。
50mLの茶色のメスフラスコに入れ、抽出液で標線まで希釈する。
標準作業溶液中のビタミンB2の濃度は5μg/mLです。希釈
分析の前に。
4.3 器具および装置
4.3.1 高速液体クロマトグラフ:UV検出器(ダイオードマトリックス
検出器)または蛍光検出器。
4.3.2 pHメーター:温度制御機能付き、精度0.01。
4.3.3 恒温水槽:0℃~100℃。
4.3.4 ニードルフィルター:0.45μmの水フィルター付き。
4.4 サンプルの準備
GB/T 14699.1の規定に従ってサンプルを採取し、少なくとも500gの
代表的なサンプル。4等分して100gに減らします。
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