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GB 5009.274-2016 英語 PDF (GB5009.274-2016)
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GB 5009.274-2016: 国家食品安全基準 - 水産物中のシガトキシンの測定
GB 5009.274-2016
国家標準の
中華人民共和国
国家食品安全基準 -
水産物中のシガトキシンの測定
発行日: 2016年12月23日
実施日: 2017年6月23日
発行者:中華人民共和国国家衛生及び計画出産委員会
州食品医薬品局。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 原則 ... 4
3 試薬と材料 ... 4
4 器具および装置 ... 5
5 分析手順 ... 6
6 分析結果の説明 ... 7
7 その他 ... 8
8 原則…8
9 試薬および材料 ... 9
10 器具および装置 ... 10
11 分析手順 ... 10
12 分析結果の説明 ... 13
13 精度...14
14 その他 ... 14
付録A シガトキシンによる死亡時刻とマウス単位の関係
... 15
付録B マウス体重の補正係数表 ... 16
付録C シガトキシン(P-CTX-1、P-
CTX-2、P-CTX-3)混合標準溶液...17
国家食品安全基準 -
水産物中のシガトキシンの測定
1 範囲
この規格は、水生生物中のシガトキシンの測定方法を規定する。
製品。
この規格は、水生生物の食用部分中のシガトキシンの測定に適用される。
製品。
方法 1 - マウスバイオアッセイ
2 原則
水産物中のシガトキシンをアセトンで抽出し、抽出物を蒸発させた後
減圧下で乾燥するには、1% Tween-60生理食塩水を
シガトキシン1% Tween-60生理食塩水を調製するための分散媒
懸濁液をマウスの腹腔内に注入し、
マウスの生存率。マウスの死亡時間とマウスの生存率の相関図によると、
マウスとマウスユニットが一致しない場合は、対応するマウスユニットを見つけ、マウスを修正します。
マウスの体重に応じて単位を設定し、シガトキシンの含有量を計算して確認する
(マウス単位の毒性)。
3 試薬と材料
特に指定がない限り、すべての試薬は分析試薬であり、水はグレード
1 GB/T 6682 で規定されている水。
3.1 試薬
3.1.1 トゥイーン60(C64H126O26)。
3.1.2 ピクリン酸 [HO-C6H2(NO2)3]。
3.1.3 アセトン(CH3COCH3)。
3.1.4 メタノール(CH3OH)。
4.5 窒素濃縮装置
5 分析手順
5.1 サンプルの準備
水産物の食べられる部分(骨抜き)を取り出し、それを細かく切って
肉エマルジョン。-18℃以下で保存してください。
5.2 サンプル抽出
サンプル200gをビニール袋に入れ、70℃の湯浴に15分間入れます。
冷却のために取り出し、アセトン400mLを加え、10分間均質化し、ブフナー漏斗を使用する。
濾液を抽出して集める。肉の残渣をさらに2回抽出する。
濾液をロータリーエバポレーターで55℃に加熱し、ほぼ乾燥するまで濃縮する。100
mLのメタノール溶液(90%)を溶解し、500mLの分液漏斗に移し、
100mLのn-ヘキサンを加え、よく振って抽出し、約30分間放置する。層状にした後、
完了したら、n-ヘキサンの上層を捨て、メタノールの下層を集める
溶液。100mLのn-ヘキサンを加えて、もう一度抽出を繰り返す。ロータリー
メタノール溶液の下層を55℃で蒸発乾固する。100mLの
エタノール溶液(25%)を加えて溶解し、分液漏斗に移し、100mLの
ジエチルエーテルを加え、よく振って10分以上放置する。層状にした後、集める。
上層のエーテルを除去します。ジエチルエーテルを使用して、下層の溶液をさらに 2 回抽出します。
エーテル抽出物を混ぜ合わせ、40℃で乾燥するまでロータリーエバポレーターで蒸発させる。5mLの
クロロホルムメタノール溶液(3+97)で濃縮物を溶解し、
目盛り付き試験管;窒素を使用して45℃で乾燥するまで濃縮;1% Tweenを使用
60-生理食塩水で2mLに調整し、シガトキシン1% Tweenが均一になるようによく振る
60規定生理食塩水懸濁液。この懸濁液0.5mLはサンプル50gに相当します。
この懸濁液を使用してマウス実験を実行します。
注意:毒素による害を避けるため、作業時には手袋を着用してください。
機器は次亜塩素酸ナトリウム溶液(5%)に1時間以上浸漬しなければならない。
毒素を分解するのに1時間かかります。
5.3 マウステスト
5.3.1 実験動物の飼育
マウスは、換気がよく、光が透過し、清潔な屋内環境で飼育されるものとする。
実験中は通常、標準的なげっ歯類用の餌と水が供給されるものとする。
5.3.2 マウステスト
マウスはランダムにテストグループ、溶媒対照グループ、ブランクグループに分けられる。
対照群では、各群に3匹のマウスがおり、各マウスの体重が測定される(正確な
0.5gまで)体重を記録します。染色法(3%〜5%など)を使用します。
どこ:
X - サンプル中のシガトキシンの毒性(MU/50g、50グラムあたり)
MU - マウス腹腔内投与量0.5mLに含まれるシガトキシンのマウス単位
注射剤、50グラムあたりのMU(MU/50g)
C -- マウスの体重の補正係数。
f -- サンプル抽出物の希釈係数。
1MUは、特定の病原体を含まない(SPF)菌の400分以内の死滅の毒性として定義されます。
昆明産雄マウス20.0g;シガトキシン9.10ngに相当。
6.2 結果判定
試験群のすべてのマウスの死亡時間が400分を超える場合、
報告書のサンプル中のシガトキシンは0.98 MU/50g未満です。
試験群の平均死亡時間が50分~400分の場合、次のように計算します。
式(1);そしてサンプル中のシガトキシンの毒性を××× MU/50gとして報告する。
試験群の平均死亡時間が 50 分未満の場合は、サンプル溶液を希釈します。
平均死亡時間が50分~400分になるまで、実験用に3匹のマウスを選択します。
式(1)に従って計算し、サンプル中のシガトキシンの毒性を報告する。
例:×××MU/50g。
7 その他
この方法の検出限界は0.98 MU/50gです。
方法2 - 液体クロマトグラフィー - タンデム質量
分光測定
8 原則
サンプル中のシガトキシンはメタノールで抽出され、C18固相で精製される。
抽出カラム、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法で測定、
外部標準法により定量化されます。
9.5 材料
9.5.1 C18固相抽出カラム:200 mg/3mL。使用前に6mLの
メタノールと 6 mL の水を加えて活性化し、カラムを湿らせます。
9.5.2 微多孔膜:0.22μm、有機相。
10 器具および装置
10.1 液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析計:エレクトロスプレーを装備
イオン源(ESI)。
10.2 分析天秤:感度0.1mgおよび0.01g。
10.3 窒素濃縮装置
10.4 凍結乾燥機
10.5 粉砕機。
10.6 遠心分離機:速度 ≥ 5000 r/min。
10.7 ホモジナイザー:3 400 r/min ~ 24 000 r/min。
10.8 渦発振器。
10.9 超音波発生装置
11 分析手順
11.1 サンプルの準備
水産物の食べられる部分を取り出し、細かく切って肉を作る
エマルジョン。-18°Cで保存してください。
11.2 サンプル抽出
サンプルを5g(0.01gの精度)計量し、凍結乾燥し、完全に粉砕し、50
mLのストッパー付き遠心管にメタノール10mLとn-ヘキサン5mLを加えます。
5000 r/minで1分間均質化し、ボルテックスして混ぜ、超音波で15分間抽出する。
分; 5000 r/minで3分間遠心分離し、n-ヘキサン相の上層を捨てる。
メタノールを試験管に移し、メタノール10mLで残留物を1回抽出する。
再度、抽出物を混合し、窒素を使用して濃縮します...
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国家標準の
中華人民共和国
国家食品安全基準 -
水産物中のシガトキシンの測定
発行日: 2016年12月23日
実施日: 2017年6月23日
発行者:中華人民共和国国家衛生及び計画出産委員会
州食品医薬品局。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 原則 ... 4
3 試薬と材料 ... 4
4 器具および装置 ... 5
5 分析手順 ... 6
6 分析結果の説明 ... 7
7 その他 ... 8
8 原則…8
9 試薬および材料 ... 9
10 器具および装置 ... 10
11 分析手順 ... 10
12 分析結果の説明 ... 13
13 精度...14
14 その他 ... 14
付録A シガトキシンによる死亡時刻とマウス単位の関係
... 15
付録B マウス体重の補正係数表 ... 16
付録C シガトキシン(P-CTX-1、P-
CTX-2、P-CTX-3)混合標準溶液...17
国家食品安全基準 -
水産物中のシガトキシンの測定
1 範囲
この規格は、水生生物中のシガトキシンの測定方法を規定する。
製品。
この規格は、水生生物の食用部分中のシガトキシンの測定に適用される。
製品。
方法 1 - マウスバイオアッセイ
2 原則
水産物中のシガトキシンをアセトンで抽出し、抽出物を蒸発させた後
減圧下で乾燥するには、1% Tween-60生理食塩水を
シガトキシン1% Tween-60生理食塩水を調製するための分散媒
懸濁液をマウスの腹腔内に注入し、
マウスの生存率。マウスの死亡時間とマウスの生存率の相関図によると、
マウスとマウスユニットが一致しない場合は、対応するマウスユニットを見つけ、マウスを修正します。
マウスの体重に応じて単位を設定し、シガトキシンの含有量を計算して確認する
(マウス単位の毒性)。
3 試薬と材料
特に指定がない限り、すべての試薬は分析試薬であり、水はグレード
1 GB/T 6682 で規定されている水。
3.1 試薬
3.1.1 トゥイーン60(C64H126O26)。
3.1.2 ピクリン酸 [HO-C6H2(NO2)3]。
3.1.3 アセトン(CH3COCH3)。
3.1.4 メタノール(CH3OH)。
4.5 窒素濃縮装置
5 分析手順
5.1 サンプルの準備
水産物の食べられる部分(骨抜き)を取り出し、それを細かく切って
肉エマルジョン。-18℃以下で保存してください。
5.2 サンプル抽出
サンプル200gをビニール袋に入れ、70℃の湯浴に15分間入れます。
冷却のために取り出し、アセトン400mLを加え、10分間均質化し、ブフナー漏斗を使用する。
濾液を抽出して集める。肉の残渣をさらに2回抽出する。
濾液をロータリーエバポレーターで55℃に加熱し、ほぼ乾燥するまで濃縮する。100
mLのメタノール溶液(90%)を溶解し、500mLの分液漏斗に移し、
100mLのn-ヘキサンを加え、よく振って抽出し、約30分間放置する。層状にした後、
完了したら、n-ヘキサンの上層を捨て、メタノールの下層を集める
溶液。100mLのn-ヘキサンを加えて、もう一度抽出を繰り返す。ロータリー
メタノール溶液の下層を55℃で蒸発乾固する。100mLの
エタノール溶液(25%)を加えて溶解し、分液漏斗に移し、100mLの
ジエチルエーテルを加え、よく振って10分以上放置する。層状にした後、集める。
上層のエーテルを除去します。ジエチルエーテルを使用して、下層の溶液をさらに 2 回抽出します。
エーテル抽出物を混ぜ合わせ、40℃で乾燥するまでロータリーエバポレーターで蒸発させる。5mLの
クロロホルムメタノール溶液(3+97)で濃縮物を溶解し、
目盛り付き試験管;窒素を使用して45℃で乾燥するまで濃縮;1% Tweenを使用
60-生理食塩水で2mLに調整し、シガトキシン1% Tweenが均一になるようによく振る
60規定生理食塩水懸濁液。この懸濁液0.5mLはサンプル50gに相当します。
この懸濁液を使用してマウス実験を実行します。
注意:毒素による害を避けるため、作業時には手袋を着用してください。
機器は次亜塩素酸ナトリウム溶液(5%)に1時間以上浸漬しなければならない。
毒素を分解するのに1時間かかります。
5.3 マウステスト
5.3.1 実験動物の飼育
マウスは、換気がよく、光が透過し、清潔な屋内環境で飼育されるものとする。
実験中は通常、標準的なげっ歯類用の餌と水が供給されるものとする。
5.3.2 マウステスト
マウスはランダムにテストグループ、溶媒対照グループ、ブランクグループに分けられる。
対照群では、各群に3匹のマウスがおり、各マウスの体重が測定される(正確な
0.5gまで)体重を記録します。染色法(3%〜5%など)を使用します。
どこ:
X - サンプル中のシガトキシンの毒性(MU/50g、50グラムあたり)
MU - マウス腹腔内投与量0.5mLに含まれるシガトキシンのマウス単位
注射剤、50グラムあたりのMU(MU/50g)
C -- マウスの体重の補正係数。
f -- サンプル抽出物の希釈係数。
1MUは、特定の病原体を含まない(SPF)菌の400分以内の死滅の毒性として定義されます。
昆明産雄マウス20.0g;シガトキシン9.10ngに相当。
6.2 結果判定
試験群のすべてのマウスの死亡時間が400分を超える場合、
報告書のサンプル中のシガトキシンは0.98 MU/50g未満です。
試験群の平均死亡時間が50分~400分の場合、次のように計算します。
式(1);そしてサンプル中のシガトキシンの毒性を××× MU/50gとして報告する。
試験群の平均死亡時間が 50 分未満の場合は、サンプル溶液を希釈します。
平均死亡時間が50分~400分になるまで、実験用に3匹のマウスを選択します。
式(1)に従って計算し、サンプル中のシガトキシンの毒性を報告する。
例:×××MU/50g。
7 その他
この方法の検出限界は0.98 MU/50gです。
方法2 - 液体クロマトグラフィー - タンデム質量
分光測定
8 原則
サンプル中のシガトキシンはメタノールで抽出され、C18固相で精製される。
抽出カラム、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法で測定、
外部標準法により定量化されます。
9.5 材料
9.5.1 C18固相抽出カラム:200 mg/3mL。使用前に6mLの
メタノールと 6 mL の水を加えて活性化し、カラムを湿らせます。
9.5.2 微多孔膜:0.22μm、有機相。
10 器具および装置
10.1 液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析計:エレクトロスプレーを装備
イオン源(ESI)。
10.2 分析天秤:感度0.1mgおよび0.01g。
10.3 窒素濃縮装置
10.4 凍結乾燥機
10.5 粉砕機。
10.6 遠心分離機:速度 ≥ 5000 r/min。
10.7 ホモジナイザー:3 400 r/min ~ 24 000 r/min。
10.8 渦発振器。
10.9 超音波発生装置
11 分析手順
11.1 サンプルの準備
水産物の食べられる部分を取り出し、細かく切って肉を作る
エマルジョン。-18°Cで保存してください。
11.2 サンプル抽出
サンプルを5g(0.01gの精度)計量し、凍結乾燥し、完全に粉砕し、50
mLのストッパー付き遠心管にメタノール10mLとn-ヘキサン5mLを加えます。
5000 r/minで1分間均質化し、ボルテックスして混ぜ、超音波で15分間抽出する。
分; 5000 r/minで3分間遠心分離し、n-ヘキサン相の上層を捨てる。
メタノールを試験管に移し、メタノール10mLで残留物を1回抽出する。
再度、抽出物を混合し、窒素を使用して濃縮します...
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