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GB 4789.7-2013 英語 PDF (GB4789.7-2013)

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GB 4789.7-2013: 食品安全国家基準 - 食品微生物学的検査 - 腸炎ビブリオ
GB 4789.7-2013
イギリス
国家標準の
中華人民共和国
国家食品安全基準 - 食品微生物学的
検査 - 腸炎ビブリオ
発行日:2013年11月29日
2014年6月1日に実施
発行者:中国国家衛生・計画出産委員会
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 培地と試薬 ... 4
4 検査手順 ... 5
5 要件 ... 6
6 血清型別(オプション)...8
7 神奈川検定(選択)…10
8 結果とレポート ... 10
付録A 培地および試薬 ... 12
付録B 腸炎ビブリオ最確数(MPN)検索表19
国家食品安全基準 - 食品微生物学的
検査 - 腸炎ビブリオ
1 範囲
この規格は、腸炎ビブリオの検査方法を規定する。
食べ物。
この規格は、腸炎ビブリオの検査に適用される。
食べ物。
2 規範的参照
微生物実験室の日常的な滅菌および培養装置に加えて、
その他の機材・資材は以下の通りです。
a) 恒温インキュベーター。36°C ± 1°C。
b) 冷蔵庫。2°C ~ 5°C、7°C ~ 10°C。
c) 恒温水槽。36°C ± 1°C。
d) ホモジナイザーまたは滅菌乳鉢
e) 天秤。分解能0.1g。
f) 滅菌試験管。18mm × 180mm、15mm × 100mm。
g) 滅菌ストロー。1mL(0.01mL目盛り付き)、10mL(0.1mL目盛り付き)または
マイクロピペットとチップ;
h) 滅菌三角フラスコ。容量は250mL、500mL、1000mL。
j) 滅菌ペトリ皿。直径90mm。
j) 自動微生物生化学同定システム
k) 滅菌済みの外科用はさみ、ピンセット。
3 培地と試薬
3.1 3%塩化ナトリウムアルカリペプトン水。付録AのA.1を参照
3.2 チオ硫酸塩・クエン酸・胆汁酸塩・ショ糖(TCBS)寒天培地。付録AのA.2を参照
3.3 3%塩化ナトリウムトリプシン大豆寒天。付録AのA.3を参照
3.4 3%塩化ナトリウム三糖鉄寒天。付録AのA.4を参照
3.5 塩分試験培地。付録AのA.5を参照
3.6 3%塩化ナトリウムマンニトール試験培地。付録AのA.6を参照
3.7 3%塩化ナトリウムリジンデカルボキシラーゼ試験培地。A.7を参照
付録A
3.8 3%塩化ナトリウムMR-VP培地。付録AのA.8を参照
3.9 3%塩化ナトリウム溶液。付録AのA.9を参照
3.10 ワグツマ血液寒天培地。付録AのA.10を参照
3.11 オキシダーゼ試薬。付録AのA.11を参照
3.12グラムの染色液。付録AのA.12を参照
3.13 ONPG。付録AのA.13を参照
3.14 ヴォーゲス・プロスカウアー (VP) 試薬。付属書 A の A.14 を参照
3.15 ビブリオ発色培地
3.16 生化学同定キット
4 検査手順
腸炎ビブリオの検査手順については図 1 を参照してください。
5.4 純粋培養
疑わしいコロニーを3つ以上拾い上げます。3%塩化ナトリウムトリプシンを塗ります。
大豆寒天培地で培養。36℃±1℃で18時間~24時間培養。
5.5 予備的識別
5.5.1 オキシダーゼ試験。オキシダーゼ試験のために純粋培養の単一培養物を選択する。
腸炎ビブリオはオキシダーゼ陽性である。
5.5.2 塗抹顕微鏡検査。疑わしいコロニーを塗抹し、グラム染色を行う。
染色し、観察形態について顕微鏡検査を行う。
腸炎ビブリオはグラム陰性、桿菌、湾曲、楕円形、
胞子なし、鞭毛あり。
5.5.3 純粋に培養された単一の疑わしいコロニーを採取する。3%ナトリウムをトランスフェクトする。
塩化物三糖寒天培地を傾斜させ、底層に穴を開ける。
36°C±1°Cで24時間培養し、結果を観察する。ビブリオの反応は
3%塩化ナトリウム三糖鉄寒天培地中の腸炎菌は、
底部は黒ではなく黄色に変わり、泡は出ません。斜面の色は
変わらない、あるいは赤が深くなり、パワーが増します。
5.5.4 好塩性試験。純粋に培養された単一の疑わしいコロニーを採取します。
それぞれ0%、6%、8%、10%のペプトン水を接種し、
塩化ナトリウム濃度;36°C ± 1°Cで24時間培養観察;
液体の濁度を観察する。腸炎ビブリオは増殖または増殖しない。
塩化ナトリウムを含まないシスプラチンと10%塩化ナトリウムを含むシスプラチンでは弱い。
6%塩化ナトリウムと8%ナトリウムのペプトン水中で活発に成長する
塩化。
5.6 識別の決定
純粋培養し、それぞれマンニトール試験培地に接種する。
3%塩化ナトリウム、リジン脱炭酸酵素試験培地、MR-VP培地。
36℃±1℃で24時間~48時間培養後、結果を観察する。3%を使用する。
ONPG試験用の塩化ナトリウム三糖寒天一晩培養。
生化学同定キットまたは自動微生物生化学検査キットを選択する
識別システム。
6 血清型別(オプション)
6.1 準備
3%塩化ナトリウムトリプシン大豆寒天試験管傾斜液2本に接種します。
36°C±1°Cで18時間~24時間培養する。3%のグリセロールを含む5%の溶液を使用する。
洗浄用塩化ナトリウム 3%塩化ナトリウムトリプシン 大豆寒天斜面培養
蒸留水 1000.0 mL
A.3.2 方法
A.3.1の成分を蒸留水に溶かします。pHを7.3±0.2に調整します。
121℃の高温で15分間殺菌します。
A.4 3%塩化ナトリウム三糖鉄寒天
A.4.1 原材料
ペプトン 15.0g
プロテオースペプトン 5.0g
牛肉ゼリー 3.0g
酵母エキス 3.0g
塩化ナトリウム 30.0g
乳糖 10.0g
ショ糖 10.0g
グルコース 1.0 g
硫酸第一鉄(FeSO4)0.2g
フェノールレッド 0.024 g
チオ硫酸ナトリウム(Na2S2O3)0.3g
寒天 12.0g
蒸留水 1000.0 mL
A.4.2 方法
A.4.1の成分を蒸留水に溶かします。pHを7.4±0.2に調整します。
適切な容量の試験管に分注し、高温で滅菌する。
121℃の温度で15分間加熱し、傾斜が
長さは4cm~5cm、高さは2cm~3cmです。
A.5 塩分試験媒体
A.5.1 原材料
トリプトン 10.0 g
塩化ナトリウム 異なる量を加える
蒸留水 1000.0 mL
A.5.2 方法
A.5.1の成分を蒸留水に溶かします。pHを7.2±0.2に調整します。
合計5本のボトルを用意し、各ボトル100mLずつ追加します。
塩化ナトリウムの添加量を変えて。(1) 添加なし、(2) 3g、(3) 6g、(4) 8g、(5)
10gを試験管に分注し、121℃の高温で15分間滅菌する。

A.6 3%塩化ナトリウムマンニトール試験培地
N, N, N', N'-テトラメチル-p-フェニレンジアミン塩酸塩を
蒸留水。光の当たらない2℃~5℃の冷蔵庫で保管してください。7日以内に使用してください。
A.11.3 試験方法
細いガラス棒または1回接種針を使用して、新鮮な(24時間)ものを選択します。
コロニー。オキシダーゼ試薬で湿らせたろ紙に塗布します。フィルターが
10秒以内に紙がピンクまたは紫色に変色した場合、オキシダーゼ試験は陽性となる。
変色はオキシダーゼ試験では陰性となる。
A.12 グラム染色液
A.12.1 クリスタルバイオレット染色液
A.12.1.1 原材料
クリスタルバイオレット 1.0g
95%エタノール 20.0 mL
1%シュウ酸アンモニウム水溶液 80.0 mL
A.12.1.2 方法
クリスタルバイオレットをエタノールに完全に溶かし、アンモニウムと混ぜる
シュウ酸溶液。
A.12.2 グラムヨウ素溶液
A.12.2.1 原材料
ヨウ素 1.0g
ヨウ化カリウム 2.0g
蒸留水 1000.0 mL
A.12.2.2 方法
ヨウ素とヨウ化カリウムを混ぜる。蒸留水を加えて少し振る。
完全に溶解したら、蒸留水を加えて300mLにします。
A.12.3 サフラニン複合液
A.12.3.1 原材料
サフラニン 0.25g
95%エタノール 10.0 mL
蒸留水 1000.0 mL
A.12.3.2 方法
サフラニンをエタノールに溶かし、水で希釈します。
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