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GB 4789.41-2016 英語 PDF (GB4789.41-2016)
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GB 4789.41-2016: 食品安全国家基準 - 食品微生物学的検査 - 腸内細菌科
GB 4789.41-2016
イギリス
国家標準の
中華人民共和国
国家食品安全基準 -
食品衛生の微生物学的検査 -
腸内細菌科の検査
発行日: 2016年8月31日
2017年3月1日に実施
発行者:国家衛生・家族計画委員会
中華人民共和国
3. 何もする必要はありません - この規格の全文は自動的に
0〜60分以内にあなたのメールアドレスに即時配信されます。
目次
1 適用範囲 ... 3
2 用語と定義 ... 3
3 装置および材料 ... 3
4 培養培地および試薬 ... 4
5 テスト手順 ... 5
6 操作手順 ... 5
7 レポート...9
8 テスト手順 ... 9
9 操作手順 ... 11
10 レポート...11
付録A 結果の計算例 ... 12
付録B 培養培地および試薬 ... 14
付録 C 腸内細菌科の最確数検索表
(MPN)...18
国家食品安全基準 -
食品衛生の微生物学的検査 -
腸内細菌科の検査
1 適用範囲
この規格は、食品中の腸内細菌科細菌の試験方法を規定する。
この規格の最初の方法は、腸内細菌科の細菌数に適用される。
腸内細菌科の含有量が多い食品では、
食品中の腸内細菌科細菌数に適用される。
腸内細菌科の含有量。
2 用語と定義
2.1
腸内細菌科
オキシダーゼ陰性の好気性または通性嫌気性グラム陰性非胞子性細菌
与えられた条件下でブドウ糖を発酵させて酸を生成するバチルス菌。
2.2
腸内細菌科の列挙
グラム当たりまたはミリメートル当たりの腸内細菌科の菌数を、
この規格に規定する方法。
2.3
最も確からしい数; MPN
ポアソン分布に基づく間接列挙法。
3 装置と材料
微生物学における従来の滅菌・培養装置に加えて、
実験室、その他の装置および材料は次のとおりです。
3.1 恒温インキュベーター。36°C ± 1°C。
3.2 冷蔵庫。2°C~5°C。
3.3 ウォーターバス。46°C ± 1°C。
3.4 バランス。感度0.1g。
3.5 顕微鏡。10倍~100倍。
3.6 ホモジナイザー
3.7 シェーカー。
3.8 滅菌ピペット。1ml(0.01mlの目盛り付き)、10ml(0.1mlの目盛り付き)または
マイクロピペッターとチップ。
3.9 滅菌三角フラスコまたは同等の容器。容量150 mlおよび500 ml。
3.10 滅菌培養皿。直径90mm。
3.11 滅菌試験管。18 mm × 180 mmおよび15 mm × 150 mm。
3.12 pHメーターまたはpH比色管または精密pH試験紙。
4 培養培地と試薬
4.1 緩衝ペプトン水(BPW)。B.1を参照。
4.2 緩衝グルコースブリリアントグリーン胆汁ブイヨン(EEブイヨン)。B.2を参照。
4.3 クリスタルバイオレット中性赤色胆汁酸グルコース寒天培地(VRBGA)。B.3を参照。
4.4 栄養寒天培地(NA)。B.4を参照。
4.5 グルコース寒天培地。B.5を参照。
4.6 グラム染色溶液。B.6を参照。
4.7 オキシダーゼ試薬。B.7を参照。
4.8 滅菌1mol/l NaOH。B.8を参照。
4.9 滅菌1mol/l HCl。B.9を参照。
方法I 腸内細菌科菌床カウント
方法
6.1.1 固体および半固体の標本。標本25gを滅菌容器に入れ、
225mlのBPWを含む均質カップ、8000で1分~2分間均質化する
r/min ~ 10 000 r/min、または225 mlのBPWを含む均質バッグに入れて、
振動式ホモジナイザーで1分~2分振動させて均一にする
1.10 の標本ソリューション。
6.1.2 液体検体。滅菌ピペットを使用して25mlの検体を吸収し、
滅菌した三角フラスコ(適切な量の滅菌ガラスビーズが
あらかじめフラスコに用意しておいたBPW 225mlを入れ、混ぜて
1.10の均質試料溶液。
6.1.3 1ml滅菌ピペットまたはマイクロピペットを使用して1mlの検体を吸収する
1.10の均一溶液を滅菌試験管の壁に沿ってゆっくりと注ぐ
9mlのBPWを含む(ピペットまたはチップが接触しないように注意する)
希釈液の表面で)試験管を振動させるか、1mlの滅菌ピペットを交換して吹き飛ばす。
繰り返して混ぜ、1.100の均一な試料溶液を作る。
6.1.4 6.1.3の操作手順に従って、10倍に増やす
連続希釈した標本均質溶液。希釈度が増加するごとに、
1mlの滅菌ピペットまたはチップを1つ交換します。
検体の均質溶液は、検体の接種の完了まで
15分を超えないようにしてください。
6.2 プウトプレートと培養
6.2.1 検体の汚染の推定と
関連する限界要件を満たすために、2〜3の均質な試料溶液(液体
適切な連続希釈液で標本を調製し、
各希釈度の溶液を2枚の滅菌プレートに分注する。その間に、1mlの
それぞれ BPW を 2 つの滅菌プレートにブランク コントロールとして追加します。
6.2.2 10ml~15mlのVRBGA(恒温水槽に入れてもよい)を注ぎ、
保温用の容器(46℃±1℃)に入れて46℃に冷却し、各皿に注ぐ。
プレートを注意深く混ぜて、標本、均質溶液、培地を混ぜます。
6.2.3 寒天が固まったら、同じ培地を薄く注ぎ、
プレートの表面。広がる成長を防ぎ、コロニーを作ります
特徴がより明らかになります。
6.2.4 VRBGAプレートの上層寒天が固まったらプレートを裏返し、
36°C±1°Cで18時間~24時間培養する。
6.3 典型的なコロニーの列挙と確認
6.3.1 腸内細菌科の典型的なコロニーはピンク色から赤色または紫色のコロニーである
沈殿リングの有無にかかわらず、コロニー数が通常の範囲にあるプレートを選択します。
15 CFU~150 CFUでコロニーの成長を広めることなく、
典型的なコロニー。コロニー数はコロニー形成単位(CFU)で表されます。
9 操作手順
9.1 検体の希釈
6.1と同じです。
9.2 接種と培養
9.2.1 非選択的前濃縮
検体の汚染の推定と関連する制限に従って
要件に応じて、適切な連続の均質な試料溶液を3つ選択する
希釈度ごとに3本の試験管、合計9本の試験管
BPWで培養し、36°C ± 1°Cで18時間 ± 2時間培養する。
9.2.2 選択的濃縮
BPWの各培養管から培養物1mlを移し、EEブロス10mlに接種し、
36°C ± 1°Cで24 ± 2時間培養する。
9.2.3 分離
接種ループを使用して、すべてのEEブロスから培養物を1ループ採取し、画線培養を行う。
BRBGAプレートに接種し、36°C±1°Cで24±2時間培養し、
プレート上に典型的なコロニーが存在します。
9.3 典型的なコロニーの確認
典型的なコロニーについては 6.3 を参照してください。
10 レポート
腸内細菌科はグラム陰性の無胞子桿菌で、発酵する。
グルコースを産生する酸であり、オキシダーゼ陰性である。1つのコロニーが確認されると
腸内細菌科、それによって代表されるEEチューブは腸内細菌科陽性です。
EE陽性チューブ数に応じてMPN表(付録Cを参照)を参照する
検体1グラム(ミリメートル)あたりのMPN値を報告します。
重量は MPN/g で、サンプリング量は MPN/ml で表します。
付録B
培養培地および試薬
B.1 緩衝ペプトン水 (BPW)...
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国家標準の
中華人民共和国
国家食品安全基準 -
食品衛生の微生物学的検査 -
腸内細菌科の検査
発行日: 2016年8月31日
2017年3月1日に実施
発行者:国家衛生・家族計画委員会
中華人民共和国
3. 何もする必要はありません - この規格の全文は自動的に
0〜60分以内にあなたのメールアドレスに即時配信されます。
目次
1 適用範囲 ... 3
2 用語と定義 ... 3
3 装置および材料 ... 3
4 培養培地および試薬 ... 4
5 テスト手順 ... 5
6 操作手順 ... 5
7 レポート...9
8 テスト手順 ... 9
9 操作手順 ... 11
10 レポート...11
付録A 結果の計算例 ... 12
付録B 培養培地および試薬 ... 14
付録 C 腸内細菌科の最確数検索表
(MPN)...18
国家食品安全基準 -
食品衛生の微生物学的検査 -
腸内細菌科の検査
1 適用範囲
この規格は、食品中の腸内細菌科細菌の試験方法を規定する。
この規格の最初の方法は、腸内細菌科の細菌数に適用される。
腸内細菌科の含有量が多い食品では、
食品中の腸内細菌科細菌数に適用される。
腸内細菌科の含有量。
2 用語と定義
2.1
腸内細菌科
オキシダーゼ陰性の好気性または通性嫌気性グラム陰性非胞子性細菌
与えられた条件下でブドウ糖を発酵させて酸を生成するバチルス菌。
2.2
腸内細菌科の列挙
グラム当たりまたはミリメートル当たりの腸内細菌科の菌数を、
この規格に規定する方法。
2.3
最も確からしい数; MPN
ポアソン分布に基づく間接列挙法。
3 装置と材料
微生物学における従来の滅菌・培養装置に加えて、
実験室、その他の装置および材料は次のとおりです。
3.1 恒温インキュベーター。36°C ± 1°C。
3.2 冷蔵庫。2°C~5°C。
3.3 ウォーターバス。46°C ± 1°C。
3.4 バランス。感度0.1g。
3.5 顕微鏡。10倍~100倍。
3.6 ホモジナイザー
3.7 シェーカー。
3.8 滅菌ピペット。1ml(0.01mlの目盛り付き)、10ml(0.1mlの目盛り付き)または
マイクロピペッターとチップ。
3.9 滅菌三角フラスコまたは同等の容器。容量150 mlおよび500 ml。
3.10 滅菌培養皿。直径90mm。
3.11 滅菌試験管。18 mm × 180 mmおよび15 mm × 150 mm。
3.12 pHメーターまたはpH比色管または精密pH試験紙。
4 培養培地と試薬
4.1 緩衝ペプトン水(BPW)。B.1を参照。
4.2 緩衝グルコースブリリアントグリーン胆汁ブイヨン(EEブイヨン)。B.2を参照。
4.3 クリスタルバイオレット中性赤色胆汁酸グルコース寒天培地(VRBGA)。B.3を参照。
4.4 栄養寒天培地(NA)。B.4を参照。
4.5 グルコース寒天培地。B.5を参照。
4.6 グラム染色溶液。B.6を参照。
4.7 オキシダーゼ試薬。B.7を参照。
4.8 滅菌1mol/l NaOH。B.8を参照。
4.9 滅菌1mol/l HCl。B.9を参照。
方法I 腸内細菌科菌床カウント
方法
6.1.1 固体および半固体の標本。標本25gを滅菌容器に入れ、
225mlのBPWを含む均質カップ、8000で1分~2分間均質化する
r/min ~ 10 000 r/min、または225 mlのBPWを含む均質バッグに入れて、
振動式ホモジナイザーで1分~2分振動させて均一にする
1.10 の標本ソリューション。
6.1.2 液体検体。滅菌ピペットを使用して25mlの検体を吸収し、
滅菌した三角フラスコ(適切な量の滅菌ガラスビーズが
あらかじめフラスコに用意しておいたBPW 225mlを入れ、混ぜて
1.10の均質試料溶液。
6.1.3 1ml滅菌ピペットまたはマイクロピペットを使用して1mlの検体を吸収する
1.10の均一溶液を滅菌試験管の壁に沿ってゆっくりと注ぐ
9mlのBPWを含む(ピペットまたはチップが接触しないように注意する)
希釈液の表面で)試験管を振動させるか、1mlの滅菌ピペットを交換して吹き飛ばす。
繰り返して混ぜ、1.100の均一な試料溶液を作る。
6.1.4 6.1.3の操作手順に従って、10倍に増やす
連続希釈した標本均質溶液。希釈度が増加するごとに、
1mlの滅菌ピペットまたはチップを1つ交換します。
検体の均質溶液は、検体の接種の完了まで
15分を超えないようにしてください。
6.2 プウトプレートと培養
6.2.1 検体の汚染の推定と
関連する限界要件を満たすために、2〜3の均質な試料溶液(液体
適切な連続希釈液で標本を調製し、
各希釈度の溶液を2枚の滅菌プレートに分注する。その間に、1mlの
それぞれ BPW を 2 つの滅菌プレートにブランク コントロールとして追加します。
6.2.2 10ml~15mlのVRBGA(恒温水槽に入れてもよい)を注ぎ、
保温用の容器(46℃±1℃)に入れて46℃に冷却し、各皿に注ぐ。
プレートを注意深く混ぜて、標本、均質溶液、培地を混ぜます。
6.2.3 寒天が固まったら、同じ培地を薄く注ぎ、
プレートの表面。広がる成長を防ぎ、コロニーを作ります
特徴がより明らかになります。
6.2.4 VRBGAプレートの上層寒天が固まったらプレートを裏返し、
36°C±1°Cで18時間~24時間培養する。
6.3 典型的なコロニーの列挙と確認
6.3.1 腸内細菌科の典型的なコロニーはピンク色から赤色または紫色のコロニーである
沈殿リングの有無にかかわらず、コロニー数が通常の範囲にあるプレートを選択します。
15 CFU~150 CFUでコロニーの成長を広めることなく、
典型的なコロニー。コロニー数はコロニー形成単位(CFU)で表されます。
9 操作手順
9.1 検体の希釈
6.1と同じです。
9.2 接種と培養
9.2.1 非選択的前濃縮
検体の汚染の推定と関連する制限に従って
要件に応じて、適切な連続の均質な試料溶液を3つ選択する
希釈度ごとに3本の試験管、合計9本の試験管
BPWで培養し、36°C ± 1°Cで18時間 ± 2時間培養する。
9.2.2 選択的濃縮
BPWの各培養管から培養物1mlを移し、EEブロス10mlに接種し、
36°C ± 1°Cで24 ± 2時間培養する。
9.2.3 分離
接種ループを使用して、すべてのEEブロスから培養物を1ループ採取し、画線培養を行う。
BRBGAプレートに接種し、36°C±1°Cで24±2時間培養し、
プレート上に典型的なコロニーが存在します。
9.3 典型的なコロニーの確認
典型的なコロニーについては 6.3 を参照してください。
10 レポート
腸内細菌科はグラム陰性の無胞子桿菌で、発酵する。
グルコースを産生する酸であり、オキシダーゼ陰性である。1つのコロニーが確認されると
腸内細菌科、それによって代表されるEEチューブは腸内細菌科陽性です。
EE陽性チューブ数に応じてMPN表(付録Cを参照)を参照する
検体1グラム(ミリメートル)あたりのMPN値を報告します。
重量は MPN/g で、サンプリング量は MPN/ml で表します。
付録B
培養培地および試薬
B.1 緩衝ペプトン水 (BPW)...
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