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GB 4789.36-2016 英語 PDF (GB4789.36-2016)

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GB 4789.36-2016: 食品安全国家基準 - 食品微生物学的検査 - 大腸菌 O157:H7/MN の検査
GB 4789.36-2016
イギリス
国家標準の
中華人民共和国
国家食品安全基準 -
食品衛生の微生物学的検査
大腸菌O157.H7/NMの検査
発行日:2016年12月23日
2017年6月23日に実施
発行者:国家衛生・家族計画委員会
中華人民共和国;
中国食品医薬品局。
3. 何もする必要はありません - この規格の全文は自動的に
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目次
序文…3
1 適用範囲 ... 4
2 器具と材料 ... 4
3 培養培地および試薬 ... 5
4 テスト手順 ... 5
5 操作手順 ... 6
6 結果報告 ... 8
7 テスト手順 ... 8
8 操作手順 ... 9
9 結果報告 ... 11
付録A 培地および試薬 ... 12
序文
この規格は、GB/T 4789.36-2008「食品の微生物学的検査」に代わるものである。
衛生 – 大腸菌 O157.H7/NM の検査。
GB/T 4789.36-2008 と比較すると、この規格の主な変更点は次のとおりです。
-- 規格名が「国家食品安全規格」に変更されました。
食品衛生の微生物学的検査 - 大腸菌の検査
「O157.H7/NM」;
-- 標準の適用範囲が変更される。
-- 装置および材料が変更される。
-- 培養培地および生化学反応のテキスト記述が変更されます。
-- 「方法II 免疫磁気ビーズ捕捉法の原理」は
削除されました。
-- 「方法III 全自動酵素結合蛍光免疫測定法
「機器スクリーニング方法」が削除されました。
-- 「方法IV 全自動病原細菌検出システムスクリーニング
「方法」は削除されます。
国家食品安全基準 -
食品衛生の微生物学的検査
大腸菌O157.H7/NMの検査
1 適用範囲
この規格は、食品中の大腸菌O157.h7/nmの試験方法を規定する。
この規格は、食品中の大腸菌O157.h7/nmの試験に適用される。
2 器具と材料
微生物学における従来の滅菌・培養装置に加えて、
実験室、その他の装置および材料は次のとおりです。
2.1 恒温インキュベーター。36°C ± 1°C。
2.2 冷蔵庫。2℃~5℃。
2.3 恒温水槽。46°C ± 1°C。
2.4 天秤。感度は0.1gと0.01g。
2.5 ホモジナイザー
2.6 顕微鏡。10倍~100倍。
2.7 滅菌ピペット。1ml(0.01mlの目盛り付き)、10ml(0.01mlの目盛り付き)
0.1 ml)またはピペットとチップ。
2.8 滅菌均質カップまたは滅菌均質バッグ。容量500ml。
2.9 滅菌培養皿。直径90mm。
2.10 pHメーターまたは精密なpH試験紙。
2.11 長波UVランプ。365 nm、電力≤6W。
2.12 マイクロ遠心管。1.5 ml または 2.0 ml。
2.13 磁気プレート、磁気プレートフレーム、試料ミキサー。
2.14 微生物学的識別システム。
3 培養培地と試薬
3.1 改良ECブロス(mEC + n)。A.1を参照。
3.2 改良ソルビトール-マッコンキー寒天培地(CT-SMAC)。A.2を参照。
3.3 三糖鉄寒天培地(TSI)。A.3を参照。
3.4 栄養寒天。A.4 を参照。
3.5 半固体寒天。A.5 を参照。
3.6 ラウリル硫酸ペプトンブロス - MUG(MUG-LST)。A.6を参照。
3.7 オキシダーゼ試薬。A.7を参照。
3.8 グラム染色溶液。A.8を参照。
3.9 PBS-Tween 20ローション。A.9を参照。
3.10 亜テルル酸カリウム(分析試薬)。
3.11 セフィキシム。
3.12 大腸菌O157用発色培地。
3.13 大腸菌O157およびH7の診断血清またはラテックス凝集反応
O157の試薬。
3.14 識別キット。
3.15 抗大腸菌O157免疫磁気ビーズ。
方法I ルーチン培養法
4 テスト手順
大腸菌の日常培養法の試験手順については図1を参照
O157.H7/NM。
シモンズクエン酸塩 陰性
リジン脱炭酸酵素陽性(紫)
オルニチン脱炭酸酵素陽性(紫)
セロビオース発酵 陰性
ラフィノース発酵陽性
MUGテスト陰性(蛍光なし)
動的テスト 動的または非動的
5.4.2.2 生化学的同定キットまたは微生物学的同定システムが
選択したら、栄養寒天培地からコロニーを採取し、希釈液を使用して
適切な濁度の細菌懸濁液と生化学的同定キットを使用する
または識別のための微生物学的識別システム。
5.4.3 毒性遺伝子検査(オプション項目)
検体中に大腸菌O157.H7またはO157.NMが検出された場合は、
Vero細胞またはHela細胞を接種し、細胞変性効果を観察することによってテストしました。
ベロ毒素の存在はさらなる検査を必要とするが、
志賀毒素遺伝子の遺伝子プローブ検査またはポリメラーゼ連鎖反応(PCR)法
(stx1とstx2)、eae、hlyなど。上記の検査にキットを使用する場合、
遺伝子に関しては、製品マニュアルに従う必要があります。
6 結果報告
生化学検査と血清学的検査の結果を要約し、
大腸菌O157.H7または大腸菌O157.NMが検出されるか、検出されないか
25 g (または 25 ml) の検体。
方法II 免疫磁気ビーズ捕捉
方法
7 テスト手順
免疫磁気ビーズ捕捉法の試験手順については図2を参照のこと。
大腸菌O157.H7/NM。
8.2.2 試料に応じてマイクロ遠心管に番号を付け、
品質管理株の場合は、各検体につき1本のマイクロ遠心管を使用し、
磁気プレートフレームに挿入します。大腸菌O157を振動させます
免疫磁気ビーズ懸濁液をボルテックスミキサーに静かに注ぎ、オープナーを使用して開けます
各マイクロ遠心管のキャップを閉め、大腸菌O157を20μL加える。
各チューブに免疫磁気ビーズ懸濁液が入っています。
8.2.3 mEC+nブロス増菌培地1mlをマイクロ遠心管に加え、
キャップをかぶせ、10秒間軽く振動させます。1つのサンプル添加チップを
各検体と品質管理株は検体から分離されなければならない。
交差汚染を防ぐためです。
8.2.4 結合。18℃~30℃で、上記のマイクロ遠心管を回転させる。
試料ミキサーの磁気プレートフレームと一緒に、または手で回転させて
大腸菌O157が免疫磁性体に完全に接触するように10分間穏やかに
ビーズ。
8.2.5 捕捉。磁気プレートを濃縮された磁気ビーズに挿入する。
磁気プレートフレーム。3分以内に磁気プレートフレームを傾けて、
懸濁液とキャップ上の免疫磁気ビーズが完全に収集されます。その後、
壁の中央に丸いまたは楕円形の茶色の蓄積が見えるようになります。
マイクロ遠心管。
8.2.6 上清の吸収。滅菌した細長いピペットを1本取り、静かに吸収する。
免疫磁気ビーズから液体の奥深くに挿入して上清を採取する
液体レベルと反対方向に蓄積します。液体が吸収されて液体が
レベルが免疫磁気蓄積を通過すると、速度を落として
免疫磁気ビーズは吸収されます。吸収された上清に
磁気ビーズをマイクロ遠心チューブに戻し、同じことを繰り返します。
8.2.5の手順に従います。各検体ごとに滅菌済みの細長いチューブを1本交換します。
免疫磁気ビーズの落下。一部の標本の磁気ビーズの蓄積、
特に脂肪分の多いものは底に沈みやすい。
上清を吸収すると、磁性ビーズの損失を防ぐのが難しく、
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